基因工程讲稿-5-2.pptVIP

第三步：应用正负选择法分离出已成功地敲除掉了目标基因的ES细胞克隆，这样的ES细胞系亦叫做突变的ES细胞。 第四步：挑选生活力旺盛的突变的ES细胞，体外注射到超数排卵的供体小鼠的胚泡中。这个过程叫做胚胎干细胞转移(embryonic stem cell transfer)。 第五步：将此胚泡移植（Transplant）到受体母鼠，亦称养母(foster mother)的子宫中。由此发育长成的当代转基因小鼠，其个体中含有一定比例的来自ES细胞的细胞群体，称为嵌合鼠。实验中所用的供体小鼠、受体小鼠和提供ES细胞的小鼠，三者均应是属于近交系(inbred line)。 三、转化载体 （一） SV40病毒载体 在动物基因工程的研究领域中，关于病毒载体方面的工作，占据着相当重要的地位。已有许多实验证明，一些具有DNA基因组或其生活史中出现有DNA阶段的真核生物的病毒，经改建后，都可以发展成为动物基因工程的载体。这主要是由于动物病毒具有如下的特点： ① 动物病毒含有能够被真核细胞识别的有效的启动子。这些启动子不但可以启动动物基因工程中常用的一些标记基因的表达，而且还能够启动克隆的外源基因的表达。 ② 有许多种动物病毒，在其感染周期中都能够持续地复制，使其基因组拷贝数达到相当高的水平。因此，任何插入在动物病毒基因组内的外源基因，在病毒感染之后的很短时间内，其剂量就会得到显著的增加，并实现