荧光探针法的研究有机溶剂中DNA构像的变化.pdfVIP

—— 荧光探针法研究有机溶剂中DNA构像的变化+ 黄伟东李来生鄢远 (南昌大学应用化学研究所南昌330047) 关键词DNA构像荧光法有机溶剂 当前大多数分子生物学研究条件下DNA的构像与自然条件下相比具有明显的差异，活 体细胞中DNA多以高度紧凑的球形构像形式存在，紧凑程度甚至比卷曲状态高10s倍，因 此DNA的折叠研究将有助于对某些生命生理现象的理解【11。近年来，人们观察到有机介质 中DNA的折叠现象．研究方法主要采用能直接观察到单个DNA分子形态的显微荧光法 (Fluorescence Force Microscopy)和原子力显微法(Atomic Microscopy)B_3】。在本文中， 我们运用简便的荧光探针法研究小牛胸腺DNA在一些有机介质中的构像变化．并结合热变 性等试验揭示DNA在有机溶剂中的分子行为，得到了一些有价值的结果。 1基本原理 溴化乙锭(EB)本身的荧光很弱，当专一性平行地嵌入到不发荧光的双螺旋DNA内 部的碱基对之间并与DNA形成复台物，荧光强度显著增强，同时EB的荧光特性的变化可 以有效地指示所处微环境中DNA构像的变化，因而EB是常用的DNA结构荧光探针之一。 EB与DNA相互作用的方式可用Scatchard方程来描述14】： 二=K(n—n C r是DNA上平均每个核苷酸键合的EB分子数．H是每个核苷酸上的成键位点数，K是 每一位点固有的结合常数．c是游离的EB浓度。 2结果与讨论 首先试验了一些醇类及酮类等有机溶剂对DNA．EB荧光光谱的影响。结果表明．随着 有机溶剂浓度的提高，DNA．EB荧光体系的荧光强度先随着有机溶剂浓度的增大，荧光强 度增加；当浓度增大到一定程度后(15％～40％)，荧光强度又会降低，较好地预示了DNA 在高浓度的有机溶剂中构像发生了折{掣wl。接着我们以乙醇为重点考察对象，考察了DNA+EB 在不同浓度的乙醇中的结合常数和结台位点．以及DNA的熔化温度(Melting Temperature，Tm)。 结合位点随着醇浓度的变化而变化。随着醇浓度的增加，结合常数减小，这意味着DNA随 着醇浓度的增大稳定性降低；结合位点的增多，说明DNA的构像发生了较大的变化。 图2是DNA在不同乙醇浓度下的热变性曲线。结果显示DNA的熔化温度Tm值随着 乙醇浓度的升高而降低．预示着DNA的稳定性随着醇浓度的增加而降低，即此时的DNA 更易解旋，因而DNA在这种高酵浓度环境中是不够稳定的。同时说明．DNA在折叠状态 ’国家自然科学基金和江西省自然科学基金资助项目。 244 ——————————————————————堡i些堂箜堕塾皇垫些 下稳定性较未折叠的时候有较明显的降低。 3结论 通过研究一些有机溶剂对DNA构像的影响．表明DNA在折叠后其构像发生了较大的 变化，稳定性也大大降低，预示其分子行为也将有较大变化。同时说明简便的荧光法将可 以用来较系统地进行DNA折叠及其分子行为的研究。 1．o％ 200000 名150000 ≥100000 睾 50000 0 0．1 0．2 O．3 0．4 0．5 r 图1 不同乙醇浓度中DNA的scatchard方程曲线图 6 5 肇 4 正 3 2 l 10