5-氮杂-2′-脱氧胞苷诱导肝癌细胞株SLIT2基因去甲基化的实验研究.pdfVIP

第３６卷第２期 安　徽　医　学 ２０１５年２月 ＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ １３７ ５氮杂２′脱氧胞苷诱导肝癌细胞株 ＳＬＩＴ２基因去甲基化的实验研究 李培坤　耿小平 ［摘　要］　目的　观察肝细胞癌（ＨＣＣ）细胞株ＳＵＮ４４９、ＢＥＬ７４０２、ＳＭＭＣ７７２１、Ｈｅｐ３Ｂ及ｅｐＧ２中ＳＬＩＴ２基因在５ＡｚａＣｄＲ作 用后，其启动子区甲基化状态及表达的变化，探讨ＨＣＣ细胞株中ＳＬＩＴ２基因调控规律及甲基化调节抑制剂５ＡｚａＣｄＲ对ＳＬＩＴ２基因 转录的影响。方法　对上述 ＨＣＣ细胞株体外培养，ＭＳＰ法检测 ＨＣＣ细胞株中ＳＬＩＴ２启动子相关区域的甲基化状况。应用 １０ ｍｍｏｌ／Ｌ浓度的５ＡｚａＣｄＲ处理体外培养的５种ＨＣＣ细胞后，ＭＳＰ法检测用药前后细胞中ＳＬＩＴ２基因的甲基化状态，ＲＴＰＣＲ法检 测用药前后细胞中ＳＬＩＴ２ｍＲＮＡ的变化。结果　ＳＬＩＴ２基因在各细胞株中启动子区呈异常高甲基化状态，ｍＲＮＡ低表达。经过５ ＡｚａＣｄＲ处理后，ＳＬＩＴ２基因启动子区呈显著去甲基化状态，其ｍＲＮＡ表达增强。结论　启动子区异常甲基化是ＨＣＣ细胞ＳＬＩＴ２基 因失活的主要原因之一，去甲基化制剂５ＡｚａＣｄＲ能逆转ＳＬＩＴ２基因甲基化状态，从而调控ＳＬＩＴ２基因表达。 ［关键词］　 ５氮杂２＇脱氧胞苷；肝细胞癌；ＳＬＩＴ２基因；ＤＮＡ甲基化 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－０３９９．２０１５．０２．００２ ５ＡｚａＣｄＲｉｎｄｕｃｅｓｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆＳＬＩＴ２ｇｅｎｅｉｎｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓ ＬｉＰｅｉｋｕｎ，ＧｅｎｇＸｉａｏｐｉｎｇ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ２３０６０１，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆ５ＡｚａＣｄＲｏｎｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｓｔａｔｅａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＳＬＩＴ２ｇｅｎｅｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ 基金项目：安徽省科技攻关计划面上项目（编号：０８０１０３０２１９１） 作者单位：２３０６０１　合肥　安徽医科大学第二附属医院普外科 纺锤体的结构和功能关系密切。目前已经证实Ｓｔａｔｈ 生细胞分化。还有研究发现在神经元细胞、再生的肝 ｍｉｎ１在包括消化系统恶性肿瘤等多种恶性肿瘤细胞 细胞、反应性增生的淋巴结细胞等增殖细胞中Ｓｔａｔｈ ［１］ ［５］ 中高水平表达 。但目前胎儿正常胰腺组织中Ｓｔａｔｈ ｍｉｎ１表达上调 ，这些与本研究结果一致。 ｍｉｎ１表达的相关研究鲜见报道。 参考文献 本研究发现，Ｓｔａｔｈｍｉｎ１阳性显色为棕黄色颗粒． 位于胞质。在＞２４周胎儿正常胰腺组织中呈较高表 ［１］　ＡｋｈｔａｒＪ，ＷａｎｇＺ，ＪｉａｎｇＷＰ，ｅｔａｌ．Ｓｔａｔｈｍｉｎｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ 达，阳性表达率显著高于＜２４周胎儿胰腺的正常组织 ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓｈｉｇｈｒｉｓｋｆｏｒｌｙｍｐｈａｔｉｃｍｅｔａｓｔａｔｉｃｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅｉｎｐＮ０ （Ｐ＜００５）；且Ｓｔａｔｈｍｉｎ１ｍＲＮＡ在＞２４周胎儿正常胰 ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪＧａｓｔｒｏ 腺组织中表达较强，呈弥漫性着色，阳性显色位于胞 ｅｎｔｅｒｏｌＨｅｐａｔｏｌ，２０１４，２９（９）：９４４－９５０ ［２］　ＧｆｒｏｅｒｅｒＳ，ＭｅｔｚｇｅｒＲ，ＦｉｅｇｅｌＨ，ｅｔａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｃｈａｎｇｅｓ 浆，呈棕黄色颗粒。Ｓｔａｔｈｍｉｎ１ｍＲＮＡ在＞２４周胎儿正 ｉｎｉｎｔｒｉｎｓｉｃｉｎｎｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｅｌｌｓｏｆＣａｊａｌｉｎｓｍａｌｌ 常胰腺组织中阳性表达率显著高于＜２４周胎儿胰腺 ｂｏｗｅｌａｔｒｅｓｉａｉｎｎｅｗｂｏｒｎｓ［Ｊ］．ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１０， 的正常组织（Ｐ＜００５）。胎儿正常胰腺组织Ｓｔａｔｈｍｉｎ１ １６（４５）：５７１６－５７２１． 已有表达，随着胎儿的发育而发生高表达，其可能在胎 ［３］　ＨａｎａｓｈＳＭ，ＳｔｒｓｈｌｅｒＪＲ，ＫｕｉｃｋＲ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａ 儿胰腺组织的生长发育中发挥了重要作用。 ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍａｌｉｇｎａｎｔｐｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎａｃｕｔｅ 在正常人体组织中，Ｓｔａｔｈｍｉｎ１表达水平在具有较 ｌｅｕｋｅｍｉａ