海洋稀有放线菌的选择性分离方法.pdfVIP

第27卷第3期，2014年7月 宁 波 大 学学 报 (理 工 版 ) 首届中国高校优秀科技期刊奖 Vo1．27No．3，July2014 JOURNALOFN1NGBOUNIVERSITY (NSEE) 浙江省优秀科技期刊一等奖 海洋稀有放线菌的选择}生分离方法 原 野，何 山 (宁波大学 海洋学院，浙江 宁波 315211) 摘要：介绍了当前海洋稀有放线茵分离中对样品常用的预处理和富集技术、培养基及抑制剂的选 择方法以及高通量／原位富集培养技术，指出了海洋稀有放线茵选择性分离方法的重点改进方向， 以进一步促进海洋难培养微生物资源的开发和利用． 关键词：海洋稀有放线菌；选择性分离；高通量培养；原位富集培养 中图分类号：Q939．13 文献标志码：A 文章编号：1001—5132(2014)03—0012—06 放线菌是微生物活性天然产物的主要来源， 1．1样品的预处理及富集 在迄今发现的 22000余种微生物来源活性化合物 为了避免因地表径流引入的陆生放线菌对分 中，约 45％产生于放线菌，尤其是链霉菌属…．稀 离产生干扰，样品采集应远离海岸6【]，且沉积物取 有放线菌(rareActinomycetes)是指链霉菌属以外的 样要使用样品采集器或人工采集表层以下的样品． 放线菌，用传统分离方法得到稀有放线菌概率比 从 自然环境中采集的样品，如不经预处理而 得到链霉菌要低很多[2]．随着陆生放线菌中发现化 直接培养，细菌会严重污染真菌和放线菌分离培 合物的重复率日益增高，近 20a来，对海洋环境中 养基．放线菌是一类革兰氏阳性细菌，主要以孢子 稀有放线菌的研究，逐渐成为天然产物研究领域 形式萌发，其孢子对外界刺激具有很强的耐受性， 的热点之一． 适当的处理能刺激其孢子萌发．而一般细菌细胞 稀有放线菌广泛分布于海洋环境中3【】，海洋环 壁相对较薄，易发生质壁分离而失去生命力 ]．因 境和地理形态的多变性和特殊性，造就了海洋中 此，利用放线菌孢子抗逆性强的特点，在样品分离 微生物的多样性4【】，这些放线菌可以产生多种具有 前进行适当的预处理，可以达到较好的分离效果． 优 良生物活性且结构新颖的化合物．但迄今分离 1．1．1干燥及干 ／湿热处理 得到的微生物尚不足 自然界微生物总量的 1％，表 天然沉积物样品可采取 自然风干、湿热(50oC， 明数以百万计的微生物物种尚未被发现[5]．海洋稀 6min)、干热(120℃，lh)预处理方法，结合 1．5％的 有放线菌的生长极易被细菌、真菌和链霉菌抑制， 苯酚，可有效地抑制细菌的生长并刺激稀有放线 较难获得纯培养，因此如何有效地选择性分离是 菌，例如游动放线菌属 ctinoplanes)、戈登氏菌属 当务之急． (Gordonia)、小双孢菌属M(icrobispora)、小单孢菌 属(Micromonospora)、诺卡氏菌属(Nocardia)和野野 1 选择性分离方法 村氏菌属(Nonomuraea)等分离[8]．较其他稀有放 选择性分离方法包括对环境样品进行预处理 线菌，罕见的链孢囊菌属(Streptosporangium)因其 与富集 、培养基成分的改进、合适抑制剂的添加， 孢子有承受和抵御外界物理或化学预处理的特性， 或有关的创新分离技术等．综合运用这些方法能 很难用传统的方法分离．因此对天然样品的干热 显著地提高稀有放线菌的分离效果．