植物抗病毒的可能机制-基因沉默.docVIP

植物抗病毒的可能机制——基因沉默 植物抗病性是植物抵抗病原物侵染的性能。1986年有人首次将烟草花叶病毒(TMV，下称)的衣壳蛋白(CP，下称)基因导人烟草获得了抗TMV转基因植株后，很多学者开展了转基因抗病毒的研究。1990年Carylon等人首先报道了转基因沉默(Transgene silencing)现象。基因沉默是指生物体中特定基因由于种种原因不表达。它发生在两种水平上，1种是转录水平上的基因沉默，另1种是转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing．PTGS．下称)。转录后水平基因沉默在植物表现型上称为共抑制，是指在外源基因沉默的同时，与其同源的内源基因的表达也受到抑制的现象。Carylon为加深花色将查尔酮合成酶基因(ehalcone synthase，CHS)转到紫花矮牵牛中，发现42％的转基因植株中不仅花色未加深，反而变为白色或紫白相间，这种转入的外源基因和内源基因共同沉默的现象就是转基因沉默。目前认为．植物基因沉默是植物长期进化形成的用来防止外来遗传物质干扰自身基因组功能和保持稳定性的重要机制，是生物体中1种不完全的原始的生物免疫系统。本文将从基因沉默的角度介绍植物抗病毒的可能机制。 1 RNA介导的病毒抗性和PTGS 近20年来，植物抗病毒基因工程的研究逐步深入。在CP基因介导的抗性研究中，对CP基因进行改造，插入翻译终止密码子或去掉翻译起始密码子，使其不能翻译产生CP蛋白，结果也能获得高抗病甚至免疫的转基因植株。这种病原来源的抗性称之为RNA介导的病毒抗性(RNA mediated virus re— sistance，RMVR．下称)。 RMVR与PTGS机制类似。两者均发生在胞质中。PTGS与RMVR两种现象具有许多共同特征，如序列特异性、与转基因的拷贝数有关，减数分裂后沉默保持的不可预见性(George，1998)，所以RMVR也是1种PTGS。一般来说，以病毒的编码区DNA或 cDNA(完整的基因或基因的一部分，特别是基因的3’端)为转基因时就容易发生PTGS。由于PTGS和 RMVR的共同特征和均通过目的RNA降解来实现的机制．所以有学者认为应将两者合称为RNA沉默”。 2 RNA的特异性降解的抗病性机制 RNA介导的抗病性策略也就是将病毒的某一基因小片段转入到植物基因组中，通过一定方式激活植物潜在的基因沉默控制系统，从而对与该病毒区段序列同源的核酸(包括植物转录出来的mRNA和入侵病毒RNA)进行序列特异性降解，这样阻止了病毒的复制而产生病毒抗性。转录后沉默表现的共抑制抗病性，其主要原因是RNA的特异性降解。对这种降解的解释归纳起来有RNA阈值模型和畸变RNA模式两类。前者最早由Lindbo等提出，他们发现与定位在细胞质内的RNA病毒同源的外源基因大量转录后，能够抵抗同源病毒的侵染。外源基因过度转录或病毒基因组的大量复制，导致细胞内特定mRNA的积累。当累积量超出植物基因组环境中的正常阈值时就诱发RNA降解。这种反应只对共抑制mRNA特异降解．而对其他类型的mRNA无影响。畸变RNA模式是指由于转基因的不完整性、排列方式以及DNA的甲基化等原因，在以转基因为模板合成mRNA过程中．同时合成一些畸变(不完整)的RNA片段。这些RNA片段被细胞内RNA聚合酶所识别，并以此为模板合成cRNA(互补或反义 RNA)，cRNA与完整的转基因mRNA或病毒RNA杂交。形成双链结构。这种双链结构被细胞内的 RNA降解体系所识别，并特异地将这些RNA降解。不论外源RNA是单链，还是双链，最后都是以dsR． NA的形式被转变成2l一或23一核苷酸片段。这些短的RNA片段形成沃森一克里克碱基对结构，激活 RNA酶．并指导RNA酶去降解外源RNA和细胞内序列相似的RNAr41。 We-Scharf等人(2000年)的研究在一定程度上解释了从畸变RNA的降解到PTGS机制。他们通过随机插人诱变。分离出1个不发生RNA沉默突变体菌株mut-6．在该菌株中克隆了1个能编码RNA解旋酶的基因Mut-6。该解旋酶可以使许多RNA病毒中的双链RNA解开螺旋。反之，如果将dsRNA转入植物细胞后，可以促进RNA沉默。 3植物采用基因沉默的策略产生抗病性 Lindbo等人首次将PTGS和植物体内的病毒联系起来．他们发现病毒侵染转基因植物后，能诱发与病毒同源的转基因沉默。沉默的激活伴随着寄主植物从原先的病毒感染中恢复，新生枝叶均无病状．且对同病毒的再次感染产生抗性。至今RMVR已在多种病毒感染的双子叶植物和单子叶植物中获得结论性证明。用携带绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的马铃薯X病毒(PVX，下称)感染GFP转基因植物后，编码GFP的病毒RNA和高度表达