三河牛和荷斯坦牛细胞因子水平和炎症相关基因多态性初步研究.pdfVIP

ANIMALBIOTECHNOLOGYBULLETIN 135 2012，VOLUMEl3，NO．1 三河牛和荷斯坦牛细胞因子水平与炎症相关基因多态性初步研究 刘超1，王晓1，吴宏军3，刘爱荣2，王雅春1，俞英卜，张沅1 (1．中国农业大学动物科技学院，北京100193；2．内蒙古自治区海拉尔农垦集团有限公司， 内蒙021008；3．内蒙古谢尔塔拉种牛场，内蒙021008) 引言 三河牛是我国第一个自主培育的乳肉兼用牛，具有较强的抗逆性和抗病性。 目前世界范围内的奶牛品种以荷斯坦为主，但随着对产量性状选择强度的增加， 乳房炎发病率也呈上升趋势。乳房炎是最广泛的奶牛常见疾病，具有发病率高、 治愈率低以及复杂的发病机制等特征，是影响奶牛业损失最严重的疾病之一。为 筛选奶牛乳房炎抗性相关分子标记，本研究以三河牛和荷斯坦牛为试验材料，测 定其血清中的IL4(白介素4)、IL6等细胞因子水平，进而分析炎症相关基因的多 态性，为乳房炎抗性相关分子标记的研究奠定基础。 材料与方法 从内蒙古海拉尔谢尔塔拉三河牛种牛场以及齐齐哈尔两个荷斯坦牛场选取具 有完备生产数据以及年龄、胎次等数据、饲养环境和管理水平一致的三河牛 126头及荷斯坦牛132头。每头牛采集奶样50ml，并立即送北京奶牛中心进行奶牛 DHI测定，获得SCC(体细胞数)。颈静脉采集血液样品，静置30分钟后低温离 (干扰素Y)等细胞因子指标。提取全血基因组DNA，运用DNA混池方法对随机 抽取的30个样本进行混池测序，检测／L6、ILIO、儿J『黝、儿J『7F等炎症反应相关基 因的SNPs。利用SASl．9．3进行相关性分析和显著性检验。 结果 相关分析结果表明，试验牛SCC与细胞因子IL6、ILl7指标呈显著正相关(P 0．05)，其余相关不显著。对／L6、ILIO、儿J黝、儿J『”基因所有的外显子以及上 游2k设计引物27对。通过混池PCR扩增和测序结果表明，三河牛群体中共发现 区。3个SNPs位于上游调控区。其中儿继因未检测到SNP，ILIO基因检测到3个 SNP，L17A和儿J丌基因各检测到8个和3个SNP突变。研究结果为今后大群牛的 基因分型及后续牛乳房炎抗性分子标记的研究提供了基础数据。 讨论 目前。奶牛乳房炎的诊断和治疗指标主要参考SCC及炎症程度，但SCC和乳房 炎的遗传-力都较低，不易在乳房炎抗病育种中有效利用(John等，2004)。 分子鉴定标记。Sakemi等(2011)报道儿6与奶牛乳房炎等级呈显著正相关，可作 实时定量qRT-PCR分析显示，这些基因均是乳房炎奶牛特异的差异表达基因，表 明细胞免疫在奶牛乳房炎发展中有重要作用。Tong等(2012)报道儿J『7删于人结 肠癌具有保护和抑制作用，研究中发现儿J材与儿J7膳因具有抗结肠癌炎症反应 的作用。本研究首先通过检测炎症相关细胞因子指标以及乳汁SCC，并利用小群 体检测儿6、ILIO、儿J材和儿J『7硅因的多态位点，为下一步对荷斯坦牛及三河牛 的大群体基因分型及与炎症相关指标的关联分析，以及为筛选乳房炎抗性分子标 记奠定了基础。 关键字：三河牛：荷斯坦； 细胞因子； 炎症相关基因； 多态性 致谢：感谢教育部基本科·研项目(2011JS006)、国家奶牛产业技术体系专项资 谢中国农业大学刘蕤及北京交通大学赵萌在采样上的大力帮助。 木通讯作者：yuying@cau．edu．cn