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第二章 生产菌种的来源 微生物工程的工业生产水平由三个要素决定，即：生产菌种的性能，发酵及提纯工艺条件和生产设备。 富集(enrichment)培养 ：是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利分离到所需的菌株。 利用固体平板的生化反应进行分离方法： 透明圈法 在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培养基混浊； 能分解底物的微生物便会在菌落周围产生透明圈，圈的大小初步反应菌株利用底物的能力。 分离水解酶产生菌时较多采用，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、核酸酶等。 2、变色圈法 对于一些不易产生透明圈产物的产生菌，可在底物平板中加入指示剂或显色剂，使目的微生物菌落周围呈现变色圈，从而能被快速鉴别出来； 3、生长圈法 将待检菌涂布于高浓度工具菌并缺少所需营养物的平板上进行培养，若某菌株能合成平板所需的营养物，在该菌株的菌落周围便会形成一个混浊的生长圈 通常用于分离筛选氨基酸、核苷酸和维生素的产生菌； 工具菌（指示菌）是一些相对应的营养缺陷型菌株。 抑菌圈法 常用于抗生素产生菌的分离筛选，工具菌采用抗生素的敏感菌。若被检菌能分泌某些抑制菌生长的物质，如抗生素等，便会在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈。 第三章 微生物的代谢调控与代谢工程 组成酶 ：不依赖于酶底物或类似物的存在而合成的酶 如葡萄糖转化为丙酮酸过程中的各种酶 诱导酶：依赖于某种底物或底物的结构类似物的存在而合成的酶 如大肠杆菌乳糖利用酶 葡萄糖效应:培养基中存在葡萄糖能够抑制其它糖的利用，只有当葡萄糖利用完以后才开始利用其它的糖，在利用其它糖时有一生长停滞期，是利用第二种糖的酶合成的时期，这种酶诱导的阻遏现象称为葡萄糖效应。（培养基中存在葡萄糖反而抑制葡萄糖产量） 1、同工酶（isoenzyme）调节 某一分支途径中的第一步反应可由多种酶催化，但这些酶受不同的终产物的反馈调节. (酶的分子结构不同) 协同反馈调节 需有一种以上终产物的过量存在方有明显的效果单个终产物过量，不产生或只产生很小的影响 累加反馈调节 每一种末端产物过量只能部分抑制或阻遏，总的效果是累加的 4、增效反馈调节 代谢途径中任一末端产物过量时，仅部分抑制共同反应中第一个酶的活性，但两个末端产物同时过量时，其抑制作用可超过各末端产物产生的抑制作用的总和。 5、顺序反馈调节 分支途径中几个末端产物抑制分支点后面第一个酶，使分支点产物积累，结果分支点产物又反馈抑制共同途径中的第一个酶，最后使整个代谢途径停止。 6、联合激活或抑制调节 由一种生物合成的中间产物参与两个完全独立的、不交叉的合成途径的控制。这种中间体物质浓度的变化会影响这两个独立代谢途径的代谢速率。 代谢工程(Metabolic Engineering)——利用生物学原理，系统分析细胞代谢网络，并通过DNA重组技术合理设计细胞代谢途径及遗传修饰，进而完成细胞特性改造的应用性学科。 代谢工程的基本过程 ：1）靶点设计2) 基因操作 3）效果分析 第四章 菌种选育 菌种选育： 应用微生物遗传和变异理论，用人工方法(或自然)造成变异，再经过筛选以得到人们所需菌种的过程 。 诱变育种：就是人为地利用物理或化学等因素，使诱变对象细胞内的遗传物质发生变化，引起突变，并通过筛选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。 出发菌株的选择： 1）选择对诱变剂敏感性强、变异幅度大的菌株作为出发菌株。 2）最好选用已经过生产选育的自发突变菌株。 3）采用具有有利性状的菌株作为亲本，如生长速度快，营养要求低等。4）由于有些菌株在发生某一变异后会对其它诱变因素的敏感性提高，故有时可考虑选择已发生其它变异的菌株作为出发菌株。例如，在金霉素生产菌的诱变中，失去（黄色）色素的变异菌株作为出发菌株则产量会不断提高。 诱变剂：凡能引起生物体遗传物质发生变异的因素，统称诱变剂。 一般采用生理状态一致的单细胞或单孢子悬液进行诱变处理的原因：1.分散状态的细胞可均匀地接触诱变剂。2.可避免长出不纯的菌落。 菌种保藏的原理和方法 美国的标准菌种保藏所（ATCC，American Type Culture Collection, Rockvill, Maryland, USA） 美国农业部农业研究服务部（ARS） 英国国立标准菌种保藏所（NCTC，National Collection of Type Culture）。 荷兰霉菌中心保藏所（CBS） 日本大阪发酵研究所 中国科学院微生物研究所的普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC） 武汉大学的中国典型培养物保藏中心（CCTCC）。 衰退（de