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用HPLC法测定肾移植病人的全血环孢素浓度 卓 海 通 南（京军区南京总医院） 环孢素C（yclosporineA,CsA)是一种 动相：(1)CH3CN:CH3OH:H2O(50:0:50); 重要的免疫抑制剂药物。它用于器官移植， （2）35:15:50; （3）25:25：50;（4）15:35: 可延长移植后器官的成活率、预防移植器 50;(5)0:50:50流速1.05ml/min。柱温比 官的排斥反应，但CsA的血药浓度与疗效和 较了41、46、51、55 四种。 毒副反应密切相关。监测血药浓度对提高安 二（）标准溶液及标准曲线 精密称取 全有效的用药至关重要。 10mgCsA用甲醇配制成100g/ml浓度的贮 目前CsA的测定方法有RIA⒂萤光偏振 备液，分装于安瓿中置-40℃备用。 免疫(TDX)、放免单克隆抗体等法[13]。但 工作标准溶液：取上述贮备液用流动相 这些方法易受代谢物影响，产生交叉反应[]， 配制成50?100?200?400?800?1600ng/ml浓 且分析精度也不如HPLC法好[4]。用HPLC 度标准溶液，按峰高或峰面积与浓度求算直 法测定CsA血药浓度国外已有报道[57]。但 线回归方程。 几乎都用C8或C18柱分析，以乙腈婊或甲醇与 三（）血样采集和样品处理 分别在口 水二元溶剂为流动相，使用柱温(7079℃?)。 服 CsA后取其谷和峰时的血样作为常规监 国内对 CsA 的分析方法报道甚少，并选用 测。做药代动力学取样为给药后2?3479、 C18或C8柱[8,9]。本文选用极性较大的CN 12h血，测定其各时间点药物浓度，按PKBP 柱，使柱温降到45?55℃妫，这样可提高柱寿 -N1程序包中程序拟合和计算药代动力学模 命30％，用乙腈、甲醇、水三元溶剂可提高 型及参数。 柱效、增加灵敏度2倍。本法已用于肾移植 血样处理 （1）取肝素抗凝全血2ml，加 病人的血药浓度监测和药代动力学研究。 2ml0.025mol/LNaOH旋转混匀30s使其溶 血； （2）加入5ml无水乙醚提取两次，乙醚 实 验 部 分 提取液在45℃空气下吹干；?3）残渣中加入 一（）仪器和试剂 贝克曼114M泵， 0.025mol/LHC1和甲醇各2ml溶解后加入 427积分仪和210A进样阀，ZW-001型可变 正己烷5ml洗涤两次； （4）在上述水相中加 波长紫外检测器 南（分厂）、波长210nm， 入2ml0.025mol/LNaOH和4ml乙醚提取两 恒温水浴器 精（度±?0.1℃，西德Haake 次，醚提取液在45℃空气下吹干。残渣用 产）。 100l流动相溶解后进样20l，按外标法峰 甲醇、乙醚、己烷、盐酸、氢氧化钠均 高定量。 为AR.级试剂，乙腈为HPLC纯，环孢素 (SandozBasleSwitzerland)。 实 验 结 果 色谱条件：1．柱UltrasphereOctyl 一（）CsA在不同柱上的色谱特性。比 5蘭μm 4.6?250mm，柱温60 ，流动相：CH3 较了C8和CN柱上对CsA的保留时间t（R、 CN:CH3OH:H2O(56:22:22)；2.柱Ultras- 峰高(H)、半峰宽(W1/2和理论塔片数(N) phereCN5m 4.6?250mm，柱温50妫，流 的影响。结果如表1。 表1 CsA在C8和CN柱上的色谱特性 数，但随甲醇量增加 tR延长，HN显著降 低。