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植物基因cDNA克隆新技术及进展.pdf
中 国 生 物 工 程 杂 志
第 22 卷第 4 期 JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY 2002 年 8 月
植物基因cD NA 克隆新技术及进展
张党权 谭晓风 杨 伟
( 中南林学院经济林育种与栽培国家林业局重点实验室 株州 412006)
( )
摘要 过去人们对植物基因的 cDNA 克隆主要集中在植物看家基因 housekeeping gene ,而
( )
对植物发育调控基因 developmental regulated gene 进行的cDNA 克隆研究工作开展得比较少 。
随着近年来基因差异表达研究技术的飞速发展 , 已建立了好几种发育调控基因的cDNA 克隆
方法 ,如从较早的DDPCR 到最近的cDNA RDA 、SSH 和 IPGI ,着重论述了 cDNA RDA 、SSH 和
IPGI 的基本技术策略 ,并对三者之间进行了比较分析 。
关键词 植物基因 cDNA 克隆 cDNA RDA SSH IPGI
随着植物分子生物学的飞速发展和各种分 隆到 了许 多新 的基 因 , 并被 收录到 EMBL 的
子克隆技术的不断建立和改进 ,研究工作者现在 GenBank 库中。但由于mRNA 差异显示技术存在
可以通过多种方法对植物基因进行 cDNA 克隆。 着重复性差 、假阳性高 、差异片段短小等缺点[4 ] ,
目前 ,植物基因的 cDNA 克隆技术大致可分为两 研究人员又在此基础上发展出 cDNA 代表性差
大类 ,一类是在已知该基因的编码产物蛋白质的 (
示分析 cDNA representational difference analysis ,简
一级结构或蛋白质多肽之局部氨基酸顺序的情 ) [5 ] ( )
称 cDNA RDA 和抑制性扣除 或减法 杂交
况下 ,依据遗传密码子反推出相应的核苷酸序 ( suppression subtractive hybridization , 简称 SSH) [6 ]
列 ,并依此序列合成寡核苷酸探针 ,然后以此探 等一些更新的技术 。最近研究人员又在综合上
针与 cDNA 文库进行杂交 , 从而筛选 出 目的基 述技术的优缺点的基础上 ,建立了一种全新的发
因。另一类方法是对编码产物未知的发育调控 育调控基因 cDNA 克隆技术 ———基因鉴定集成
基因的cDNA 克隆 ,最初研究者广泛采用的技术 (
法 integrated procedure for gene identification ,简称
( ) [ 1] ( ) [7 ]
有差异筛选法 differential screening 和扣除 减 IPGI 。
) ( ) [2 ]
法 杂交法 subtractive
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