番茄SlWRKY80基因共抑制表达影响转基因植株抗逆性的研究.pdfVIP

2014年 9月 四川大学学报 (自然科学版) Sep． 2014 第51卷 第 5期 JournalofSichuanUniversity (NaturalScienceEdition) Vo1．51 No．5 doi：103969／j．issn．0490～6756．2014．05．029 番茄 SIWRKY80基因共抑制表达 影响转基因植株抗逆性的研究 曾 辉，高永峰，刘继恺，余进德 ，黄胜雄，刘永胜 (四川大学生命科学学院，成都 610064) 摘 要 ：利用植物基 因工程技术 ，构建了植物表达载体 pBI121-35S：：SlWRKY80，并利用根 癌农杆 茵介导法转化番茄，得到转基 因阳性植株．通过 生物信息学分析 SIWRKY80蛋 白序 列与 9种物种进行 同源 比对，发现高度保 守的wRKY结构域和 C。HC型锌指结构．采用 Re— al—TimePCR分析转基因植株 中SIWRKYSOmRNA的表达情况，结果显示SlWRKYS0的表 达量显著下调 ，出现共抑制现 象．用不 同浓度 的NaCl对转基 因种子和野生型种子进行胁迫 处理 ，结果显示在 NaCl浓度为 100mM 和 150mM 时，转基因幼苗初 生根 的长度与野生型 相 比相对较短 ，显示 SlWRKY8O对初生根的生长有促进作用；用PtoDC3000接种转基因植 株和野生型植株叶片，结果显示野生型植株 叶片中细菌增殖率是转基 因植株叶片中的 2．5 倍 ，显示 SlWRKY80在番茄抗病信号转导中扮演 负调控作用． 关键词 ：番茄；SlWRKY80；共抑制 ；盐胁迫 ；PtoDC3OOO；负调控 中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：A 文章编号：0490—6756(2014)05—1035—08 CosuppressionofSIWRKY80resultedinaffecteddefenseabilityagainststresses ZENGHui，GAO Yong—Feng ，LIUJi—Kai，yUJin—De， H UANG Sheng—Xiong ．LIU Yong—Sheng (1．CollegeofLifeScience，SichuanUniversity，Chengdu610064，China) Abstract：Usingplantgeneticengineeringtechnology，plant—expressionvectorpBI121—35S：：SIW RKY80 wasconstructed．TherecombinantplasmidwasintroducedintotomatogenomeusingAgrobacterium tu— mefaciens—mediatedtransformation．Bioinformaticanalysisshowed SIWRKY80 had oneconserved W RKY domainandC，HC zinc—finger．TheanalysisofrealtimePCR revealedadistinctreductionofSI— WRKYSOexpressionlevelsinthetransgeniclinescomparedtothatofwildplants，whichmeansCO—sup— pressionappeared．Seedsofwildtypeandtransgenicplantsweretreatedwithdifferentconcentrationsof NaC1．Theresultsshowedthattheprimaryrootlengthoftransgenicseedlingswereshorterthanthatof wild—type，suggestingthattheSIWRK YSOplayanimportantroleinthegrowthofplantprimaryroot．