氯霉素ELISA检测试剂盒说明书.docVIP

氯霉素（Chloramphenicol）ELISA检测试剂盒说明书 一、概要 氯霉素 （chloramphenicol, CAP）是应用广泛的抗菌素，曾对畜禽疾病控制和治疗起到了重要作用。但由于氯霉素存在严重的副作用，能引起人的再生障碍性贫血，粒细胞缺乏症等疾病，欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。 本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度操作时间仅需小时。二、原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争氯霉素抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较可得出氯霉素的含量。 可组织（肌肉、肝脏等）、尿液、血清、肠衣牛奶等样本中氯霉素的残留。100%； 琥珀氯霉素…………………………………92%； 氯霉素-葡萄糖苷酸 ………………………57%。 五、使用单位需自备的设备及试剂 设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置 ┅┅均质器 ┅┅振荡器┅┅涡旋仪 ┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：ml ┅┅洗耳球 ┅┅容量瓶：ml ┅┅玻璃试管：ml ┅┅聚苯乙烯离心管：ml、15ml、50ml ┅┅微量移液器：单道 20(l～200(l、00(l～1000(l多道 250(l 试剂： ┅┅乙酸乙酯 ┅┅乙腈（分析纯） ┅┅正己烷 ┅┅二水合亚硝基铁氰化钠┅┅七水合硫酸锌┅┅葡萄糖苷酸酶 (Merck,Art.No.4114)┅┅醋酸钠（分析纯）（供尿样本用） ┅┅肝素钠（分析纯）（供血样本用） ┅┅醋酸（分析纯）（供尿样本用） ----去离子水 六、提供的材料与试剂 1、96孔酶标板×1块 （包被有偶联抗原） 2、标准液×6瓶：（ml/瓶） 0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb 3、高浓度标准品：（2ml/瓶） 100ppb 4、………………………… 7ml 5、液…………………………ml 6、底物液 A液………………………… 7ml 、底物液 B液 …………………………… 7ml 、终 止 液……………………………7ml 、20×浓缩洗涤 ………………………40ml 10、2×浓缩复溶液 ………………50ml 配液液0.36M 二水合亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5·NO·2H2O）溶液10.7g二水合亚硝基铁氰化钠加去离子水100ml。 配液2D液1M七水合硫酸锌（ZnSO4·7H2O）溶液 28.8g七水合硫酸锌加去离子水100ml 。 配液pH4.8 100mM醋酸钠液乙腈-水溶液用去离子水将2×浓缩复溶液按1：1（1份2×浓缩复溶液+1份去离子水）用于样本复溶在4℃环境可保存一个月。用去离子水将2×浓缩按1：（1份2×浓缩+19份去离子水）洗涤液在4℃环境可保存一个月。、样本前处理步骤样本处理前须知 处理任何样本时，都必须注意：（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （b）实验之前须检查各种实验器具是否净，实验器具，以避免污染干扰实验结果。处理样本的同时，做空白试剂对照，样本测定结果减去空白试剂结果为样本中氯霉素的实际量。 组织样本空白对照试剂的制备 ┅┅取4ml乙酸乙酯在氮气流下完全干燥； ┅┅用1ml正己烷充分溶解； ┅┅加入1ml复溶液，强烈振荡1min，静置分层后去除上层正己烷相； ┅┅取0(l水相用于分析。（）未处理的样本冷冻保存（）2-8℃避光保存24h。未加正己烷之前，吹干的样本保存效果更好。 （f）处理后的样本，如出现乳化现象，可在去除部分上层有机相，60℃水浴5～（）组织 (鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等)前处理方法 ┅┅用均质器均质组织样本； ┅┅称3.0±0.05g均质物中，加入6ml乙酸乙酯，振荡10min，3000g以上，室温（20-25℃）离心10min； ┅┅取4ml上层（约相当于2g的样本）50～60℃氮气流； ┅┅加入1ml正己烷，再加1ml1min， 3000g以上室温（20-25℃）┅┅除去上层相，取下层0ull用于分析。 （）前处理方法 ┅┅ml血）的离心管采集鸡血样本（建议采血注射器也用肝素钠润洗），血样本室温静置 1h，待析出血浆后，3000g以上，15℃离心10min； ┅┅取1ml血浆至中，加2ml乙酸乙酯振荡1min；┅┅室温（20-25℃）静置水相与有机相分层或3000g，室温（20-25℃）离心5min； ┅┅移取上层的，50～60℃氮气流； ┅┅残留物1ml复溶工作液（见配液5），用涡旋仪涡动2min溶解干燥的残留物； ┅┅取0(l