The development and optimization of ELISA for the determination of tetrodotoxin.pdfVIP

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2017-08-10 发布于河北
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The development and optimization of ELISA for the determination of tetrodotoxin.pdf

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The development and optimization of ELISA for the determination of tetrodotoxin.pdf

维普资讯 JournalofMedicalCollegesof PLA 2007；22(6) 347 Thedevelopmentand optimization ofELISA forthedetermination of tetr0d0t0xin ZHOU Yu (周玉)，LIYan—song (李岩松)，PANFeng—guang (潘风光)，LIU Zeng—shan (柳增善)， WANGZhe一 (王哲) KeyLaboratoryof Zoonoses，Ministryof Education，Instituteof Zoonoses，JilinUniversity，Changchun 130062，China Collegeof LightIndustryandEconomicsManagement，JilinUniversity，Changchun130062，China 。Instituteof FarmingandVeterinary，JilinUniversity，Changchun130062，China [Abstract] Objective：TooptimizetheELISA forthedeterminationoftetrodotoxin．Methods：Acom— petitive enzyme—linked immunosorbentassay (ELISA)wasused．In theELISA ，100 “1antigen (1．0 ~g／m1)wascoatedonthemicrotiterplatefor60minat37C orovernightat4C．Theplatewasthen washed 3timeswith PBS—T for3-5seach time．Theoptima1incubation timeformonoclona1antibody (mAb)．goatanti—miceIgG peroxidaseconjugateandOPDwere30rain，20rainand10minat37C，re— spectively．Results：Thedetection limitis0．05ngineachwel1．ThecurvewaslinearforTTX dosesbe— tween5-5000ng／ml(0．25—250ngforeveryassay)．ThelinearregressequationwasY= 0．3088X一 0．1741(R一 0．9901)．TheaveragecallbackforTTX ofmusclesandgonadswere99．74 and100．30 ， respectively．ThesensitivityofoptimizationELISA was5timesthan traditionalmethodand thetimeof 1．8h were saved．Conclusion：The optimized ELISA is an idea1method for the determination of tetrodotoxin． [Keywords] tetrodotoxin；monoclona1antibody；ELISA Tetrodotoxin (TTX)isoneofthemostpotent Othersand individuals are notallowed to process nonprotein halobiosneurotoxins．Thetoxin isdis— andsalethoseanimals． tributednotonly in invertebrate。such asstarfish， InJapanandUSA ，each puffe