SUPERGREEN核酸染料.docVIP

SUPER Green Ⅰ SUPER Green Ⅰ核酸染料简介 SUPER Green Ⅰ是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单，无须脱色或冲洗；至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25～100倍。SR Green Ⅰ与dsDNA 结合荧光信号会增强800～1000倍，用SR Green Ⅰ染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低，可适用于多种电泳分析。 SR Green Ⅰ适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。 SR Green Ⅰ与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用；另外，SR Green Ⅰ与EB相比，诱变能力大大降低。 SR Green Ⅰ核酸染料特点 ● 灵敏高：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25～100倍。 ● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。 ● 操作简单：无须脱色或冲洗。 ● 适用范围广：可适用于多种电泳分析。 ● 使用方便：不影响其它修饰酶作用。 ● 经济：价格比银染便宜。 电泳用SUPER Green Ⅰ使用方法简介 1．SUPER Green Ⅰ 预染色方法 （1该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。 （2） 工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SR Green Ⅰ稀释100倍，即为SR Green Ⅰ工作液。SR Green Ⅰ工作液可以置2～8℃冷藏一个月以上。 （3） 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。 （4） 样品染色：向分析样品中加入SR Green Ⅰ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SR Green Ⅰ与样品中DNA充分结合。SR Green Ⅰ工作液加入量为总上样量的1/10。 （5） DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSR Green Ⅰ工作液混匀，室温放置5分钟，使SR Green Ⅰ与DNA充分结合。 （6） 上样、电泳：按常规操作。 2．SR Green Ⅰ后染方法 （1） 按照常规方法进行电泳。 （2） 用PH 7.0～8.5 的缓冲液（如：TAE，TBE 或 TE），按照10000﹕1的比例稀释SR GreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。 （3） 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10～30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。 3．SR Green Ⅰ使用注意事项 （1） 在“SR Green Ⅰ预染色方法”中，电泳时间不要超过2小时，否则SR Green Ⅰ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。 （2） 在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SR Green Ⅰ可以全部从双链核酸上去掉。 （3） 如果想对用 SR Green Ⅰ染过的胶进行 Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%～0.3% 的SDS。 （4） 在紫外照射透视下，与双链 DNA 接合的 SR Green Ⅰ呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。 （5） SR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。 荧光定量PCR用SR Green Ⅰ使用方法简介 SR Green Ⅰ与dsDNA 结合荧光信号可增强800～1000倍。在PCR反应体系中，加入过量SR GreenⅠ荧光染料，SR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中的SR GreenⅠ染料分子荧光不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。 使用浓度对荧光PCR结果的影响 SR Green Ⅰ荧光定量PCR的试验成功有很多因素，但是SR Green Ⅰ的使用浓度是非常关键的因素，如果SR Green Ⅰ的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SR Green Ⅰ时应根据实际情况优化使用浓度，反应的终浓度为1×到0.2×之间。 镁离子浓度的影响 提高镁离子浓度可以降低SR Green Ⅰ对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SR Green Ⅰ进行荧光PCR反应时，镁离子浓度要比无SR Green Ⅰ 的普通 PCR 反应要高出0.5～3