全血总RNA试剂盒说明书.doc

全血总RNA试剂盒说明书 产品组成 全血总RNA试剂盒 Cat. No. 50次制备 5201050 核酸纯化柱 2 ml离心管 Buffer L9 Buffer WA（浓缩液） Buffer WBR（浓缩液） Buffer TE 说明书 50个 50个 55 ml 12 ml 12 ml 2 ml×2 1份 产品储存 Buffer L9℃储存。 其他物品和试剂如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail: technical@, 电话：400-0099-857。 产品介绍 本产品适合从μl新鲜的全血或者骨髓中分离纯化NA（包括全血中的病毒RNA）。纯化柱，的蛋白与PCR抑制物则过滤除去，NA经Buffer WA和Buffer WBR洗涤后，用Buffer TE洗脱，即可用于各种分子生物学实验。 ℃。 2）根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WBR中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。 3）由于唾液、皮肤上均含有RNA酶，请在RNA的提取的全过程中都戴口罩和乳胶手套。 4）尽量使用离体3小时内的新鲜全血或者骨髓进行RNA提取，否则将因为RNA的降解而影响最终RNA的回收效率。如果不能及时将新鲜的全血进行RNA提取，可将全血用Buffer L9溶解后于-70℃冻存。（详见步骤1） 操作步骤： 1）l Buffer L9，再加入500 μl全血或骨髓，漩涡振荡30秒混合均匀。 * 如果不能及时将新鲜获得的全血或者骨髓进行RNA提取，可在本步骤将溶解后的全血于-20℃冻存。冻存两个星期内不影响RNA的提取效率。 * Buffer L9具有腐蚀性，请戴防护用品进行操作。 2）1000 rpm离心10分钟。在一个洁净的1.5 ml 离心管中加入400 μl 无水乙醇备用。 3）μl离心上清转移到装有无水乙醇的1.5 ml 离心管中，勿弃吸头，直接用吸头吸注两次混匀，吸取混合液进入步骤4）的操作。 * 上清中所含的血色素可在洗涤步骤被除去，不影响最终RNA的纯化效果。 4）μl步骤3）中的混合液转移到核酸纯化柱（核酸纯化柱置于2ml 离心管中盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 ）弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。* 滤液无须彻底弃尽，避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染2ml 离心管在纸巾上倒扣拍击一次。弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，在核酸纯化柱中加入500 μl Buffer WA, 盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 * 确认在Buffer WA中已经加入无水乙醇。 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，在核酸纯化柱中加入00 μl Buffer WBR, 盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 * 确认在Buffer WBR中已经加入无水乙醇。 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，14000 rpm 离心1分钟。 * 如果离心机的离心速度达不到14000 rpm，则用最高速离心2分钟。 * 请勿省略该步骤，否则可能因所纯化的核酸中混有乙醇而影响后续的效果。 弃2ml 离心管，将核酸纯化柱置于一个中，在纯化柱中加入0 μl Buffer TE，盖上管盖，室温静置分钟，12000 rpm 离心。 * 如果离心机没有防泄漏的盖子，请将000 rpm 离心，以免管盖脱落而损伤离心机。弃纯化柱，洗脱的NA可立即用于各种分子生物学实验；或者将NA储存于-0℃备用* 即使电泳检测不到基因组DNA的条带，也不代表所获得的RNA中没有基因组DNA。如果要彻底去除DNA的污染，请用不含RNA酶的DNA酶处理获得的RNA。* 如果用于病毒RNA检测，适当增加模板的用量可提高检测的敏感性（终体积为50 μl的一步法RT-PCR反应体系中加入25 μl洗脱的RNA作为模板，未见明显的抑制效果）。 杭州新景生物试剂开发有限公司区 地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1号 邮编：310030 电话：0571传真：0571 仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 Ver.1