实验6植株磷素的测定.pptVIP

实验七 植株磷素的测定(钼 蓝 法) 1、植物缺磷症状 2、可再利用元素和不可再利用元素 一、实验目的 1、掌握常用的钼蓝比色法测定植株磷元素的原理和操作方法； 2、巩固分光光度计的使用。 二、实验原理 在酸性条件下,无机磷可与钼酸铵作用生成磷钼酸铵,并被氯化亚锡还原成蓝色的磷钼蓝，由蓝色的深浅即可测定磷的含量。 H3PO4 +12(NH4)MoO4 + 21HCl (NH4)3PO4·12MoO3 +21NH4Cl+ 12H2O 磷钼酸铵 (NH4)3PO4·12MoO3 (MoO2·4MoO3)2·H3PO4·4H2O 磷钼蓝 磷钼蓝的最大吸收波长为660nm. 三、实验器材 1、仪器：分光光度计、高速离心机 2、试剂: 50μg/ml标准磷溶液、钼酸铵-硫酸溶液、0.1mol/L氯化亚锡溶液 3、材料:小麦功能叶片 四、实验步骤 1、绘制标准曲线 1）取标准磷溶液分别配成浓度为0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μg/ml磷溶液各10mL；（如何配制？） 2）取上述不同浓度标准磷溶液1mL于试管中，加入钼酸铵硫酸溶液3mL，摇匀后加入SnCl22滴（约0.1ml），混匀，静置10-15min； 3）选择660nm波长，用光径1cm比色杯，以浓度0为参比溶液，测得各标准溶液的吸光度值； 4）以磷浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 2、植物组织中磷含量的测定 1）取材料2g于研钵中，加少许石英砂及5mL水研磨； 2）将匀浆移至25mL容量瓶中，将研钵中残渣一并洗入，定容至刻度； 3）取10mL该混合液的上清液于3000r/min条件下离心15min后，取提取液1mL于洁净的试管中,在上述同样条件下测其吸光度值； 4）同时做一个空白实验 5）根据标准曲线计算出提取液的浓度 6）再根据公式计算磷含量： P(μg/g叶鲜重)= C×(V/W) 式中：C为提取液的磷含量（μg/ml）； V为提取液的体积（mL）； W为样品鲜重（g）。 五、实验注意事项 1、使用钼蓝测磷法时，钼蓝铵-硫酸溶液加入体积要准确，否则会因酸度不合适而导致不显色； 2、显色时间不宜过长，蓝色易褪去； 3、实验中比色皿易着色，实验完毕，应及时用水清洗，再用70%乙醇浸泡； 4、注意氯化亚锡的配制方法和保存方法。 六、实验思考 同一植株不同部位的磷含量有何特 点？为什么？ 下周实验：植物体内硝态氮含量的测定 （请做好预习） * * * * * * SnCl2