成年大鼠心肌细胞高效激光共聚焦显微镜钙成像方法.pdfVIP

中国现代药物应用2013年 4月第 7卷第 8期 ChinJModDragAppl，Apt2013，Vo1．7，No．8 · 5 · 成年大 鼠心肌细胞高效激光共聚焦显微镜 钙成像方法 赵永星 隗和明 卢君 张广钦 摘【要】 目的 建立高效易行的测定心肌细胞钙成像方法。方法 Langendorff灌流获取成年大鼠 心室肌细胞。大鼠心肌细胞经Huo-4染色后分别加入玻璃底的6孔培养板中，连接 IonC—PaceEP刺激 器，于激光共聚焦显微镜下测定胞内钙离子浓度的动态变化。结果 约80％的细胞跟随所设频率规律 的收缩。激光共聚焦显微镜记录到与刺激器频率相同的有规则的细胞钙瞬变。加入咖啡因后钙释放增 加，提示此为钙库的钙释放。结论 利用新型的刺激装置，结合激光共聚焦显微技术 ，我们成功地获得 了高效易行的成年大鼠心肌细胞ca“成像方法。此法也可用于其他实验动物心肌细胞 ，易于记录细胞 内钙离子浓度的动态变化。 【关键词】 大鼠；心肌细胞；C—PaceEP刺激器；ca“成像；激光共聚焦显微镜 EfficientLaserConfocalCa“ImagingofAdultRatCardiacMyocytes ZHAOYong—xing，WEIHe—ming， LUJun，eta1．Departmentofclinicalpharmacy，ChinaPharmaceuticalUniversity，Nanjing210009China A【bstract】 Objective Toestablishanefficientandrelibalemethodtomeasurethecalciumreleasein cardiacmyocytesfreshlyisolatedfrom adultrodents．M ethods RatheartswereperfusedonamodifiedLangen— do system．VentricularmyocyteswereisolatedandloadedwithFluo-4fluorescentCa“ indicator．Cellswere addedintodifferentwellsofa6wellglass-bottom plate．Next，confocal Ca imagingwasperformedwithlaser— scannedconfocalmicroscopywhiletheplatewasconnectedtostimulatorandcellswerepacedatdifferentfre— quencies．Results Adultratventricularmyocyteswerequiescentlywithrod—shapemorphologyandclearand smoothedges．Approximately80％ ofcellsrespondedtopacing．Singlecelllinescanshowedregulra Ca“tran— sientswhilecaffeine(10mM)triggeredadrasticreleaseofCa“ordepletionoftheintracellularcalciumstore． Conclusion W ehavesuccessfullydevelopedanefficientmethodforhighquality lasereonfoealCa“ imaging withisolatedadultratcardiacmyocytes．Thismethodallowsefficienttestingofmultiplesampleswithin1imited times．Moreover，itcanbeextenttootheranimalcardiacmyocytesinordertorecordtheCa handlingproper- tiesbyCa“ imaging ． 【Keywords】 Cardiacmyoeytes；C-PaceEPstimulator；Calciumimaging；Laserconfoealmicroscopy 心肌细胞内的钙调控 (Calciumhandling)对于维持心脏 和心肌细胞的正常生理功能有着重要作用。钙调控失常见 诸于几乎所有的先天和后天的人类心脏病变 ，如心脏衰竭 ， 心肌肥厚等…。钙成像 (Calciumimaging)