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实验九 微生物的生理生化反应 一、实验目的 通过不同细菌（以细菌为代表来说明微生物）对不同含碳、氮化合物分解利用的情况不同来了解不同细菌碳、氮代谢类型的多样性。 二、基本原理 不同微生物对同种碳、氮化合物利用情况不同，而同一微生物对不同碳、氮化合物分解利用情况也不相同，反映出微生物具有不同酶系导致代谢类型的差异（酶系包括胞外酶系及胞内酶系）。因此，不同的微生物具有不同的酶系，利用不同物质作为底物进行反应后，产生不同的产物，在添加适当指示剂的条件下会显示不同的结果，所以可以利用微生物的不同生理生化反应来作为对微生物分类和鉴定的重要依据。 糖发酵实验细菌在分解糖或醇(如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甘油)的能力有很大的差异。有些细菌发醇某种糖后产生各种有机酸(如乳酸、醋酸、甲酸、琥珀酸)及各种气体(如氢、甲烷、二氧化碳)。有的细菌只产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来指示。在配制培养基时可预先加入溴甲酚紫【pH 5(黄)－pH7(紫)】。当细菌发酵糖产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由糖发酵管中倒置的杜氏小管中有元气泡来证明。 IMViC反应： 吲哚实验 甲基红实验 V.P.实验 柠檬酸盐实验 H2S实验 三、实验器材 1. 菌种：大肠杆菌、产气杆菌、 变形杆菌 2. 培养基：见表格 四、实验内容 2. 培养37℃ 24- 48h 3. 结果观察： ①吲哚试验：1ml乙醚萃取，剧烈摇晃静置分层，沿壁缓加吲哚试剂，观察玫瑰环。 ②M.R试验：加入甲基红试剂，阳性为红色。 ③VP试验：加40％KoH约10滴，再加等量5％α－奈酚，加热，阳性红色。 ④柠檬酸盐试验：直接观察，阳性蓝色。 ⑤糖发酵试验：直接观察，产酸黄色; 产气，杜氏小管中有气泡。 ⑥H2S试验：直接观察，阳性有黑色沉淀。 思考题 1. 假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？（P120，2 ） 2. 解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理，为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色氨的酶活性的指示剂，而不用丙酮酸? P123，2（2） 3. 说明在硫化氢试验中，醋酸铅的作用。可以用哪种化合物代替醋酸铅? P123，2（4） 上次实验习题解答 1、如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养物？请写出实验的主要步骤。 ①划单菌落培养，看长出的单菌落是否均一 ②随机挑取几个单菌落进行革兰氏染色，看染色结果是否一致； ③随机挑取几个单菌落进行生化鉴定，看反应结果是否一致。 如果上述结果一致，则说明平板上单个菌落是为纯培养物，只要某一处出现不一致，则不是纯培养物。 * * ? 试验 ? 菌名 IMViC ? 糖发酵 试验 ? H2S 试验 吲哚试验 甲基红 (M.R)试验 伏普（ VP ）试验 柠檬酸 盐试验 大肠杆菌 √ √ √ √ √ √ 产气杆菌 √ √ √ √ ? √ 变形杆菌 ? ? ? ? √ ? 培养基 蛋白胨水 培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基 柠檬酸 盐斜面 乳糖发酵 培养基 醋酸铅 培养基 阳性产物 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1.将大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌在对应培养基内接种 产生PbS黑色沉淀 穿刺 大肠、产气 H2S培养基 H2S实验 可以利用柠檬酸盐，pH升高，颜色变蓝 斜面 大肠、产气 柠檬酸盐培养基 柠檬酸盐实验 丙酮酸不分解，氧化后与α-萘酚形成红色 试管 大肠、产气 葡萄糖蛋白胨水培养基 V.P实验 丙酮酸分解为小分子酸，使得培养基颜色变红 试管 大肠、产气 葡萄糖蛋白胨水培养基 甲基红实验 产生红色玫瑰吲哚 试管 大肠、产气 蛋白胨水培养基 吲哚实验 IMViC反应 同上 试管 大肠、变形 乳糖发酵培养基 乳糖发酵 颜色变化、有气泡积聚 试管 大肠、变形 葡萄糖发酵培养基 葡萄糖发酵 糖发酵实验 现象 接种方式 菌种 培养基 实验名称 结果观察 *