邻羟基苯基荧光酮荧光光度法测定牛血清白蛋白.pdfVIP

维普资讯 第28卷 ，第6期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vo1．28，No．6，pp1336—1339 2008年 6月 SpectroscopyandSpectralAnalysis June，2008 邻羟基苯基荧光酮荧光光度法测定牛血清 白蛋 白 黄应平 ，顾 彦 ，方艳芬 ，刘玉良 ，朱圣姬 ，罗光富 1．三峡大学AlanG．Macdiarmid再生能源研究所，湖北 宜昌 443002 2．三峡大学机械与材料学院，湖北 宜昌 443002 摘 要 研究了邻羟基苯基荧光酮(0一HPF)荧光光度法测定牛血清白蛋 白(BSA)的反应条件，在 pH7．90 的B-R缓冲溶液中，邻羟基苯基荧光酮(o-HPF)与BSA作用形成稳定的结合物，导致体系荧光猝灭 ，依据 其荧光猝灭程度与外加BSA量的关系而建立定量测定BSA的方法。该方法具有 良好的选择性和稳定性，由 于采用二元体系，实验操作简单，干扰少，灵敏度较高 ，测定BSA线性范围为0．028~13．65z／g·mL一，方 法测定BSA回归方程为AF= 431．51c(10 otol·L1)+457．78，相关系数 r=0．997。测定方法 中重金属 离子如Pb(Ⅱ)等对 BSA测定允许量较低 ，其余物质的存在对BSA的测定干扰较小。通过对o-HPF与 BSA 作用荧光猝灭常数的测定及热力学常数计算，讨论了0一HPF与 BSA的作用机理 ，表明o-HPF与 BSA作用 方式主要为静电引力的非共价作用力，BSA对o-HPF荧光猝灭为分子问形成了结合物而引起的静态猝灭。 关键词 邻羟基苯基荧光酮；牛血清 白蛋 白；荧光光度法 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 文章编号：1000—0593(2oo8)o6～1336—04 用E“ ，其作为染料探针试剂用于蛋 白质 的测定报道不 引 言 多_l6卅 ，由于其一般采用三元体系，其测定方法较为复杂。 本文研究了邻羟基苯基荧光酮(0一HPF)荧光光度法测定牛血 蛋白质研究对生命科学、生物化学、临床医学等都有十 清白蛋白(BSA)的反应条件，在 pH 7．90的B-R缓冲溶液 分重要的意义，通过研究蛋白质与探针有机小分子的作用方 中，0一HPF与BSA作用形成稳定的结合物，导致体系荧光猝 式 ，可以了解其结构与功能之间的关系，揭示生命现象的奥 灭 ，据此方法可定量测定微量蛋白质 ，该方法具有 良好的选 秘 。而蛋白质的定量分析是生化、药物 、食品及临床分析最 择性和稳定性，实验操作简单，干扰少 ，灵敏度高，测定牛 常涉及的内容，也是临床检验中诊断疾病及检查疾病治疗康 血清 白蛋 白线性范围为 0．028 13．65p-g·mL一。通过对 复情况的重要指标，又是许多生化药物分离提纯和质量检验 0一HPF与BSA作用荧光猝灭常数的测定及热力学常数计算， 中最常用的手段 ，某些生命物质如酶、多肽、蛋白质及蛋 白 讨论了0一HPF与BSA的作用机理，表明0一HPF与BSA作用 质激素的分离纯化更是离不开蛋白质的定量测定。因此蛋白 方式主要为静电引力的非共价作用力。 质的定量测定在生命科学、临床医学和化学研究中占有十分 重要的地位E。 1 实验部分 蛋白质的定量分析方法有很多，从最早的浊度法、凯氏 定氮法 ，到目前研究最多、应用最广 、操作较为简便 的分子 1．1 主要仪器和试剂 光谱分析法，还有新发展起来的共振瑞利散