扶正解毒汤对硫酸镍诱导16HBE细胞微核形成的抑制作用.pdfVIP

扶正解毒汤对硫酸镍诱导16HBE 细胞微核形成 的抑制作用1 1 1 1 2 1 吕晓云 ，蒲晓丽 ，朱玉真 ，白德成 ，王敏 1 兰州大学中西医结合研究所，兰州（730000 ） 2 兰州大学医学实验中心，兰州（730000 ） E-mail ：lvxy@ 摘 要：目的研究中药扶正解毒汤（FJD ）对硫酸镍（NiSO4 ）诱导人支气管上皮细胞（16HBE ） 微核形成的抑制作用。方法 分别以NiSO4 暴露、FJD 含药血清与NiSO4 共同处理体外培养 的 16HBE 细胞，观察其微核率的变化，并采用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM ）检测不同 处理组细胞内镍（Ni ）、镁（Mg ）、锌（Zn ）离子浓度及自由基含量的变化。结果 与阴性对 照组相比，NiSO4 （400µmol/L ）暴露组细胞微核率、细胞内Ni2+浓度及自由基含量均明显增 高（P0.01 ），而细胞内Mg2+ 、Zn2+浓度则明显降低（P0.01 ）。低、中、高剂量FJD 血清 与 NiSO4 共同处理后，细胞微核率分别为 4.4 ％、2.7 ％、1.4 ％，显著低于NiSO4 暴露组 （P0.05 ～0.01 ），且FJD 血清的作用呈剂量－效应关系（r= ﹣0.734,P0.05 ）；同时，与NiSO4 暴露组相比，细胞内Ni2+ 浓度及自由基含量下降，Mg2+ 、Zn2+浓度升高（P0.05 ～0.01 ），接 近阴性对照组。结论 FJD 对镍诱导 16HBE 细胞微核形成有明显的抑制作用，其机制可能与 调节染镍细胞内某些金属元素含量变化及清除自由基有关。 关键词：扶正解毒汤，含药血清，硫酸镍，微核，离子，自由基 镍化合物为一类多系统、多器官、多细胞毒物及人类确证致癌物。体外实验研究证实， 硫酸镍（NiSO4 ）等水溶性镍化合物可通过自由基作用等机制诱导哺乳类及啮齿类细胞染色 体畸变，姐妹染色单体交换，基因突变，DNA 断裂，细胞恶性转化及癌变[1，2] 。近10 余年 来，本课题组已开展了以复方中药扶正解毒汤（FJD ）拮抗镍毒性的系列研究，结果表明， FJD 对NiSO [3，4] 4 暴露大鼠及慢性镍暴露人群的多器官损伤具有显著的拮抗作用 。本研究在 建立NiSO4 暴露诱导培养人支气管上皮细胞（16HBE）微核形成模型的基础上，首次从体外 途径研究 FJD 对NiSO4 遗传毒性的抑制作用及其可能的机制，旨在为中医药防治重金属毒 临床研究提供新的理论依据。 1. 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 细胞及动物 16HBE （美国ATCC ），纯种青紫兰兔16 只，雄性，体重（2.1±0.3 ）kg ， 由中国兰州生物制品研究所提供（合格证号：14－004 ），常规饲养。1.2 中药 FJD 由红芪、 茯苓、丹参、枸杞、当归、莪术、连翘按4:4:3:3:2:2:2 组方，生药由甘肃省药材公司提供， 经鉴定全部符合《中华人民共和国药典》规定。上药混合，加三蒸水煎煮，制备成含生药 4g/ml 药液，4 ℃保存备用。 1.1.2 主要试剂及设备 分析纯 NiSO4 、丝裂霉素（MMC ）、荧光染料 acridine orange(AO) （Sigma 公司），MEM 培养基、胰蛋白酶、（GIBCO 公司），小牛血清（杭州四季青生物工 程材料公司），镍离子探针Newport Green DCF(N-7991) 、镁离子探Mag-fluo-4AM(M-14206) 、 锌离子探针 Zinc GreenIndication(Z-6901) 、自由基探针乙酰乙酸盐-2 ，7-二氯氢化荧光素 （D-399 ）（美国Molecular Probe Inc. ），Lx-50 型荧光倒置显微镜（日本OLYMPUS ），TCS sp2 型激光扫描共聚焦显微镜系统（德国Leica ），MCO-15AC 型CO2 恒温培养箱（日本SANYO ）， 1本课题得到教育部博士点专项科研基金