丙二醛含量测定方法.pptVIP

植物组织或器官中丙二醛含量的测定 一、实验目的 二、实验原理： 实验仪器： 紫外可见分光光度计 离心机 四、实验步骤： 1 MDA的提取 称2g叶片，加入10％三氯乙酸(TCA)2ml及少量石英砂，研磨；进一步加入8mlTCA充分研磨，接着把匀浆液以4000r／min离心10min，其上清液即为MDA提取液。 2 MDA显色反应及测定 取2ml MDA提取液（对照组取2ml 蒸馏水），在加2ml 0.6％TBA混匀，在试管上加棉塞，置沸水中加热15min，迅速拿出水浴锅冷却，以4000r／min离心15min ，于波长532nm和450nm下测定OD值。 五、结果计算 以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，分别计算衰老和对照组的值。 MDA浓度(μmol/L)=6.45OD532-0.56OD450 D450、D532分别代表450nm、532nm波长下的光密度值。 六、注意事项： 0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol·L-1） 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。 * * 1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。 2.了解丙二醛积累对细胞的伤害 硫代巴比妥酸 TBA 丙二醛 3,5,5′-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川） 逆境 膜脂的过氧化作用 丙二醛 酸性 棕红色(最大吸收峰 在532nm) 三、实验材料： 受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：