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第五章人血清中基质细胞衍生因子SDF．1的纯化和鉴定
上样于C18毛细管液相色谱柱中。
利用LC．ESI．MS对样品进行分析检测。调节分流，使流速控制在
0．8．1I-tL／min，系统压力600-800 peak)图，采用
psi。根据色谱．质谱基峰(Base
临时移开石英毛细管柱、中断电喷雾，由石英毛细管柱尖端出口收集峰组分，再
进行ELISA分析。
5．2．3．6数据处理
3．1
在同一洗脱峰内紧邻时间间隔里采集到的质谱图，质谱峰经过Bioworks
白序列及质量数进行比对。
5．3结果
5．3．1ELIsA方法分析肝素亲和柱对于血清中SDF一1的富集效果
L健康人的血清样品，经肝素亲和固相萃取柱富集SDF一1，在2mL肝
100p
L血清样本
素亲和富集的洗脱液中取200pL进行ELISA分析，同时使用lOp
作为肝素富集效果的对照。ELISA结果表明，经肝素富集过的血清样品中于血
清原液中的SDF．1浓度接近，见图5．2。肝素对与SDF．1没有明显的富集效果。
5．3．2分析型HPLC分离纯化SDF-1
经分析型HPLC分离纯化的各组分，用ELISA进行跟踪。结果显示，100
UL血清经HPLC分离的各组分中未检测到SDF—l。
5．3．3毛细管HPLC分离纯化SDF-1及数据分析
图5．3是亲和富集样品的LC—ESI—MS谱图(Base
peak)。两个主峰的质谱图
(图5．4和图5-5)经过Bioworks
算其分子量为8191Da和7743
(3．68)。
89
蛋白质组学技术在生物标志物发现和鉴定中的应用研究
LI
SA分析
5．3．4石英毛细管柱高压液相分离组分的E
在石英毛细管柱尖端收集第40．50min的洗脱组分，加入ELISA结合缓冲液
L，进行ELISA分析，见图5-6。结果表明，该系洗脱组分可能为人
稀释至501J
SDF．1的蛋白片段。
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图5—3．LTQ．LC．MS线性梯度洗脱色谱医](BasePeak)。箭头所指的为方框中局部
放大的色谱峰。
第五章人血清中基质细胞衍生因子SDF．I的纯化和鉴定
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