Smad4基因抑制人类胃癌细胞株生长作用机制.pdfVIP

上 海 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) ·546 · ( ) Journal of Shanghai J iaotong U n iversity M edical Science Vo l. 27 N o. 5 M ay 2007 文章编号 : 　0258 - 5898 (2007 ) 05 - 0546 - 06 ·基础研究 · Smad4基因抑制人类胃癌细胞株生长的作用机制 程时丹 , 　王晓瑾 , 　乔敏敏 , 　周季兰 , 　吴云林 (上海交通大学 医学院瑞金医院消化内科 , 上海 　200025) 摘 　要 : 目的 研究 Sm ad4基因对人类胃癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的影响 ,探讨其对人类 胃癌细胞生长抑制的作用机制 。 方法 运用脂质体介导转染方法将 Sm ad4基因导入其表达缺失的胃癌 M KN 28细胞株中 ,经 G4 18筛选 ,获得稳定表达 Sm ad4 基 因的 Sm ad4 + M KN 28细胞和作为对照的 Sm ad4 - M KN 28细胞 。体外培养亲本细胞 、Sm ad4 + M KN 28细胞和 Sm ad4 - M KN 28细 胞 ,各组细胞于第 1、3、5、7天取三瓶细胞计数 ,计算平均值 ,并绘制生长曲线 ;细胞培养 48 h后应用流式细胞仪检测细胞周期和 凋亡率的改变 ;用 R TPCR 和 W e stern b lotting方法检测细胞 B cl2、B ax基因的 mRNA 和蛋白的表达 。结果 稳定转染 Sm ad4 重组 + - ( ) + 质粒的 Sm ad4 M KN 28细胞较未转染的 Sm ad4 M KN 28 细胞生长速度减慢 P 0. 05 ; 流式细胞仪检测结果示 Sm ad4 ( ) ( ) ( ) M KN 28细胞 G G 期细胞百分数增加 P 0. 05 , S期细胞百分数减少 P 0. 05 ,细胞凋亡增加 P 0. 05 ; R TPCR 结果示 0 1 + ( ) ( ) Sm ad4 M KN 28细胞 B ax基因表达增加 P 0. 05 , B cl2基因表达减少 P 0. 05 ,W estern b lotting结果示两者的编码蛋白也出 现相应的变化 。结论 恢复 Sm ad4表达后细胞增殖减慢 ,凋亡增加 ,促凋亡基因表达上调 ,抑制凋亡基因表达下调 ,两者比值增 大 ,从而使肿瘤细胞的生长受到抑制 。 关键词 : Sm ad4; 　胃癌细胞株 ; 　质粒 ; 　增殖 ; 　凋亡 中图分类号 : R 735. 2; 　Q 786　　　　文献标志码 : A M echan ism of suppression effect of Sm ad4