墓头回提取物作用白血病K562细胞蛋白双向电泳方法建立.pdfVIP

LISHIZHENMEDICINEAND RESEARCH20l1 VOL．22NO．8 MATERIAMEDICA 时珍国医国药2011年第22卷第8期 墓头回提取物作用白血病K562细胞蛋白 双向电泳方法的建立 刘婷婷1，卫东锋1，赵春燕2，苏刚3，吴剑华2，卢 艳2，曹慧明2，程卫东h (1．兰州大学基础医学院中西医结合临床研究所，甘肃兰州730000； 2．兰州大学药学院药物化学研究所，甘肃兰州730000； 3．兰州大学基础医学院遗传研究所，甘肃兰州730000) 摘要：目的建立适用于体外培养的K562细胞总蛋白的双向电泳图谱，提高电泳分辨率和重复性，以进一步了解中药墓 头回作用于白血病细胞的新机制。方法采用标准裂解法提取K562细胞总蛋白，后续进行丙酮沉淀和三氯乙酸／丙酮沉 淀，分剐比较一步裂解法所得蛋白和丙酮沉淀法、三氯乙酸／丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱，优选最佳的样品制备 方法。此外在等电聚焦时，聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化。结果丙酮沉淀法不仅能减少蛋白降解，而且增加蛋 白的溶解性，因此丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱显示出更好的溶解性和重复性，在聚焦条件上对传统聚焦条件的 优化使横向和纵向拖尾有明显改善，所得图谱蛋白点更清晰，分离更完全，能获得分辨率较高的双向电泳图谱。结论在 标准裂解液提取蛋白基础上结合丙酮沉淀法更适于制备K562细胞的双向电泳样品，等电聚焦(IEF)电泳时适当延长除 盐时间能更有效的分离K562细胞全蛋白。而且后续实验证明此方法同样成功建立了墓头回作用白血病K562细胞蛋白 和肿瘤组织蛋白2一DE图谱。 关键词：K562细胞；双向电泳； 三氯乙彰丙酮沉淀； 丙酮沉淀；墓头回 DOI标识：doi：10．3969／j．issn．1008-0805．2011．08．030 一 一 中图分类号：R543．5文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2011)08．1871-03 InterventionOfK562Cen DiversifoliousPatriniaRootExtractand of by theTwo—DimensionalMaps Electrophoresis LIU Jian．hua2，LUYan2，CAO Ting—tin91，WEIDong-fen91，ZHAOchun—yan2，SUGan93，WU Wei．don91 ChineseandWestern BasicMedM Universi- ofCombining Medwine，School Sciences，Lanzhou (1．Department of ty，Lanzhou730000；2．InstituteofPharmacologicalChemistry，CollegeofPharmacology，LanzhouUniversity， Lanzhou BasicMedwal Heredity，School Sciences，Lanzhou 730000；3．Departmentof of 730000) Toestablishthetwo—dimensional tofurtherunder-