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第三届佳染瘤防控基础研究与应用技本论坛
手足口病病毒分离方法的研究
罗敏杨洪张海龙冼慧霞陈惠玲吴微姚相杰何雅青’
基金项目：广东省医学科技基金(B2011288)
作者单位：广东省深圳市疾病预防控制中心518055
作者简介：罗敏，副教授。主要从事病毒与绍胞的相互作用研究
【摘要】目的：探讨影响手足口病病毒分离培养的町能因素以及方法的改进。
方法：取手足口病患儿的粪便、肛拭子或脑脊液、疱疹液、咽拭子，其中以粪便
为主，经Hank’S甲衡缓冲液(HBSS)重悬震荡后，离心取上清液接种于横纹肌肉
瘤传代细胞(RD．A细胞)，二次传代后通过肠道病毒敛细胞病变效应(CPE)分析
及EV71、CAl6及肠道病毒通用试剂盒进行荧光定最PCR的方法来鉴定病毒分
离效果。结果：RD．A细胞能够有效的分离EV71、CAl6和其他肠道病毒，采样
时间在发病3日内，病毒分离效果达到66．7％，3目以上，病毒分离效粜仅有
29．1％。未添加万古霉索、阿米卡星和制菌霉素的病毒分离，污染率达到75％，
分离效率为13．6％，添加三种抑制细菌和霉菌的抗生素后，污染率达到3．93％，
分离效率达到54．9％。结论：采样时问在发病3日内、有效的抑制细菌及霉菌的
生长、合理的细胞接种密度可以明显提高病毒的分离培养效率。
【关键词】手足口病：病毒分离：细胞病变效应
virusesisolationfrom with
onthe
Study patientshand，foot
mouthdisease
and
Luo Hui—xia，Chen
Min，YangHong，ZhangHai—long，Xian Hui—ling，WuWei，YaoXiang—fie，
HeYa-Qing*
findthedetermineand the
reason
[Abstract】Objective：To improve
rateofVirusesfrom with andmouthdisease．
isolation patientshand，foot
Methods：The cerebralfluid，vesiclefluid
specimens(includingspinal
the inoculatedintoRD—Acells
andthroatswabs，but st001)were
mainly
forisolationofenteroviruses(EV)．Theisolateswereidentified
by
effect thentherealtimereverse
test(CPE)and transcription
cytopathic
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第三届佳染病防控基础研究与应且技苤论坛
reaction(realtimeRT～PCR)for
polymerase EV，Enterovirus71
Coxsacki
(Enterovirus
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