2010本科生第7讲.pptVIP

b.渣滓在罐底与用环式空气分布管所形成的死角 c.不锈钢衬里的死角 操作时要注意避免罐内发生真空现象。采用复合钢板(将两种不同材质的钢板轧合为一体的钢板)制造发酵罐，因为两层钢板紧密结合在一起，中间没有空隙，所以不会产生上述问题，是一种理想的材料。 d.接种管路的死角 4.4.2渗漏 设备和管件的渗漏一般是指设备和管件由于腐蚀、内应力 或其他原因形成微小漏孔所发生的渗漏现象。这些漏孔很小，特别是不锈钢材料形成的漏孔更小，有时肉眼不能直接觉察，需要通过一定的试漏方法才能发现。 a.设备渗漏的原因 发酵液中腐蚀性物质对设备的腐蚀磨蚀. 发酵液中固体物料因搅拌桨的搅动与冷却管摩擦而引起 管外壁磨损. 冷却介质和加热时蒸汽的冲击，引起管内壁的磨损. 设备加工不良 弯管时，弯头处管壁变薄 焊接不良 b.盘管渗漏的防止 放罐后要认真清洗发酵罐 控制冷却水质量，降低其中氯离子含量 对盘管定期检查、试漏，及时发现漏隙 空气分布管渗漏的防止 C.管件的渗漏防止 与发酵罐相连接的管路很多，有空气、蒸汽、水、 物料、排气、排污等管路，管路多，相应的管件和 阀门也多。管道的连接方式、按装方法以及选用的 阀门形式对防止污染有很大的关系。所以，与发酵 有关的管路、阀门不能同一般化工厂的化工管路完全 一样，而有其特殊的要求。 4.5 操作不当导致染菌的防止 为防止染菌，有关人员要严格按规程操作，特别是补料、取样、接种等。对罐压力的降低，泡沫顶盖，发酵液倒流过滤器等情况应严格操作与管理。 5、发酵染菌后的措施 种子培养或种子罐中发现污染及时倒罐，清洗。 发酵早期染菌可以适当添加营养物质，重新灭菌后再接种发酵。 中后期染菌可以加抗生素或正常发酵液，降低温度、降低通风量、停止搅拌等措施。对于发酵后期产物已积累到一定浓度应该提早放罐。 噬菌体污染的措施： 重消法、轮换菌种法、并罐法等措施凡染菌的罐要找染菌的原因，对症下药，染菌后的培养基必须灭菌后才可放下水道。该罐也要彻底清洗，进行空罐消毒，才可进罐。染菌严重时，车间环境要用石灰消毒，空气用甲醛熏蒸。特别，若染噬菌体，罐内、空气必须用甲醛蒸汽消毒。 * (一)大批发酵罐染菌 整个工厂中各个产品的发酵罐都出现染菌现象而且染的是同一种菌，一般来说，这种情况是由使用的统一空气系统中空气过滤器失效或效率下降使带菌的空气进入发酵罐而造成的。大批发酵罐染菌的现象较少但危害极大。所以对于空气系统必须定期经常检查。 (二)部分发酵罐(或罐组)染菌 生产同一产品的几个发酵罐都发生染菌，这种染菌如果出现在发酵前期可能是种子带杂菌，如果发生在中后期则可能是中间补料系统或油管路系统发生问题所造成的。通常同一产品的几个发酵罐其补料系统往往是共用的，倘若补料灭菌不彻底或管路渗漏，就有可能造成这些罐同时发生染菌现象。另外，采用培养基连续灭菌系统时，那些用连续灭菌进料的发酵罐都出现染菌，可能是连消系统灭菌不彻底所造成的。 (三)个别发酵罐连续染菌和偶然染菌 个别发酵罐连续染菌大多是由设备问题造成的，如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损，特别是冷却管的不易觉察的穿孔等。设备的腐蚀磨损所引起的染菌会出现每批发酵的染菌时间向前推移的现象，即第二批的染菌时间比第一批提早，第三批又比第二批提早。至于个别发酵罐的偶然染菌其原因比较复杂，因为各种染菌途径都可能引起。 * 三、从染菌的类型来分析 所染杂菌的类型也是判断染菌原因的重要依据之一。 一般认为，污染耐热性芽抱杆菌多数是由于设备存在死角或培养液灭菌不彻底所致。污染球菌、酵母等可能是从蒸汽的冷凝水或空气中带来的。在检查时如平板上出现的是浅绿色菌落(革兰氏阴性杆菌)，由于这种菌主要生存在水中，所以发酵罐的冷却管或夹套渗漏所引起的可能性较大。污染霉菌大多是灭菌不彻底或无菌操作不严格所致。 * 接种、移种等无菌操作需要在无菌室内进行。无菌室面积不宜过大，一般约4—6米2高约2．6米。为了减少外界空气的侵入，无菌室要有1—3个套间(缓冲过道)(参照图7—1)。无菌室内部的墙壁、天花板要涂白漆或采用磨光石子，要求无裂缝，墙角最好做成圆弧形，便于揩擦清洗以减少空气中微生物的潜伏场所，室内布置应尽量简单，最好能安装空气调节装置，通入无菌空气并调节室内的温湿度。无菌室的每个套间一般都用紫外线灭菌。通常用30瓦紫外线灭菌灯照射20—30分钟即可。紫外线杀菌的效率还与室内空气的性质有关；空气温度高杀菌效率高，空气中灰尘多杀调效率低，而相对湿度高则紫外线灯的使用寿命长。紫外线能穿过石英但不能透过玻璃。 * 罐体的穿孔 浸没在液体中的罐体部分都有可能