乙型肝炎病毒DNA克隆菌落原位杂交.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing) ‘(2);35-371984 实 验 技 术 与 乙型肝炎病毒DNA克隆的菌落原位杂交 方 苏国富 徐永强 刘传暄 王嘉玺 马清钩 法 军（事医学科学院基础医学研究所，北京） 在遗传工程的DNA重组试验中，需从大 1.pAol-HBV质粒DNA的制备 将含 量的转化子中筛选含特殊 DNA 序列的克隆， 有 pAo,HBV重组质粒的菌株置37℃培养，离 尤其是当被克隆的基因中无选择标记时，应用 J乙收集菌体，然后参照Zasloffl，报道的酸酚方 菌落原位杂交进行筛选是最理想的。其主要 法、Strongin等I71［，的制备电泳方法，以及氯化艳 优点是特异性强，因此它成为DNA体外重组 密度梯度超速离心法Ial［，获得纯的pAoiHBV质 实验的重要方法之一。 为了便于使 Grunstein 粒 DNA,, 等习〔的菌落原位杂交法在我国推广应用，我们 2.琼脂糖凝胶电泳 采用垂直板电泳装 对 Grunstein等的方法作了适当修改，并对影 置。电泳缓冲液为：400mMTri