抗GBM抗体特异性单链抗体scFv3原核表达载体的构建及表达.pdfVIP

ISSN1007—8738 志(ChinJCellMolImmuno1)2010，26(3 255 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2010)03-0255-03 抗 GBM 抗体特异性单链抗体 scFv3原核表达载体的构建及表达 王雅楠，刘章锁 ，邢国兰，赵国强，肖 静，王 沛 (郑州大学第一附属医院肾内科，河南郑州450000) [摘 要] 目的：构建单链抗体 scFv3的原核表达载体 1 材料和方法 pET28a．scFv3并诱导表达 ，纯化并检测表达产物的免疫抗原 1．1 材料 抗GBM抗体的单链抗体 scFv3的基因片段是在 性。方法：用PCR扩增抗肾小球基底膜 (GBM)抗体单链抗体 北京大学第一医院通过噬菌体展示技术筛选所得。克隆载体 scFv3基因，构建pGEM．scFv3重组质粒并测序。将重组基因 pGEM．TEasyVector购 自Promega公司，表达载体 pET28a 亚克隆于原核表达载体 pET28a(+)中，转化大肠杆菌 BI21 (+)购 自Novagen公司。大肠杆菌Topl0、BL21(DE3)均来