第七章 离体授粉.doc

第七章 离体授粉 离体授粉离体授粉离体授粉）））离体授粉离体授粉离体柱头授粉离体授粉离体授粉 图1 离体授粉3种方式示意图(引自Razdan，1993)离体柱头授粉 离体柱头授粉是指通过雌蕊的离体培养，使无菌花粉授于柱头上，得到含有可育的种子和果(图a)。离体柱头授粉的方法通常是在花药尚未开裂时切取母本花蕾，消毒后，在离体柱头授粉是一种接近于自然授粉的试管受精技术在烟草、小麦 1.2.2离体子房授粉 通过人工方法将花粉直接引入子房，使花粉粒在子房腔内萌发，并进行正常受精，最后获得(intraovarian pollination)。子房内授粉可分为两 1.2.2.1活体子房内授粉活体子房内授粉是指被授粉的子房并不离体，仍然在活体植株上，对其整 花蕾去雄后1～2d即可将父本花粉引入活体母本的子房中。花粉粒引入子房中的方法有两lOOmg／L100～300个花粉等植物中已获得成功。 离体子房(图-1b)。取即将开花的花蕾，经过表面消毒，剥离花萼和花瓣，去掉(引入方法同活体子房内授粉)，从而实现受精过程。Inomata(1979)进行两性不亲和物种油菜 1.2.3离体胚珠授粉 离体胚珠授粉是指离体培养未受精的胚珠，并在胚珠上授粉，最终在试管内结出正常种(图-1c)。离体胚珠授粉既可以将胎座上切下的单个胚珠(裸露胚珠)接种在培养基上， 在实际应用中，活体子房内授粉适用于子房较大的植离体授粉 有性杂交是常规育种的一个主要手段，通过这个手段，植物育种家不仅能把同一物种不同品种的性状结合在一起，而且还能把同一属不同种的性状结合在一起，从而创造出优良的植物新品种或新类型。有性杂交的做法是，在控制的条件下，用选定父本的花粉人工授给母本柱头。在被子植物中，包含着卵细胞(雌配子)的雌配子体长在子房腔内，受到子房壁和珠被的严密保护。花粉落在柱头上以后，与柱头相互作用而萌发，由萌发孔长出花粉管，花粉管穿越柱头和花柱组织进入胚珠以后，在卵细2个精子，1个与卵细胞结合形成合子，另1个与2个极核融合形成初生胚乳核。 在自然界，一个柱头可能接受到各种各样的花粉，但并非所有落在柱头上的。而远缘杂交的受精前障碍的克服，可采用消除柱头和花柱的障碍，把花粉粒直接送入子房让花粉直接与胚珠接触，20世纪60年代初期，在完全人为(pollination in vitro)技术的研究离体授粉的方法试验材料的选择 在进行离体授粉实验时，最好选用子房较大并有多个胚珠的植物，如茄科、罂、石竹科植物等。在这些植物中，其胎座上着生成百个 在单子叶植物中，最先获得成功的是玉米的离体子房授粉，后来离体胚珠授粉也获得成功。1／3切除，使胚珠外露。这种方法操作简便，在技术熟练情况下不易伤害胚珠，而且能在短时 不论离体柱头授粉还是胚珠授粉，多保留母体花器官组织有利于离体授粉的成功。如在小麦(45℃，5min)后，将父本花药塞人母本的颖花中，然后将带有一段枝梗的颖花直插在培养离体授粉的程序 离体授粉的一般程序是：①确定开花、花药开裂、授粉、花粉管进入胚珠和受精的时间；②去雄(或子房)的试管内授粉。 为了避免非实验要求的授粉，用作母本的花蕾必须在开花之前去雄并套袋。开花之后1～2d70％酒精中漂洗数秒后，3～4次，去掉柱头和花柱，剥去子房壁，(胚)，玉米可用授粉前子房(由于子房有若干层苞叶保护，不必进行表面消毒)，可将果穗切成小2行共4～10个子房，获得的大量无菌 为了在无菌条件下采集花粉，需要把尚未开裂的花药从花蕾中取出，置于无菌培养皿中直到 离体授粉成功的标志是(或子房)可以在适宜其生长的培养基上培养，培养条件也无特殊要求。光照强度一般为1 0001x，光照时间10～12h／d。受精后的胚，有的可发育成种子，如烟草、矮牵牛、康乃馨等；有的5周后，子房上可直接长出植株。 胚珠和子房培养 胚珠培养胚珠培养胚珠培养的意义为：①利用胚珠培养技术，使杂种尽早培养，防止杂种胚早期败育，获得杂胚珠培养能和花药培养一样，诱导出大孢子或卵细胞增殖，形成单倍体植株，用于单倍体胚珠培养方法 材料的选择和灭菌培养受精胚珠，可根据培养的要求，由大田或温室取回授粉时间合70％的酒精表面消毒30s，5％的次氯酸钠溶液灭菌10min，无菌水冲洗4～5次，无菌条件下剥离。用解剖刀沿纵轴切开子 （2）培养基 培养基多为White、Nitsch、MS等，Nitsch使用更普遍。培授粉后7d，胚珠处于球形胚期，将其剥离置于蔗4％～10％的培养基上，即可发育为成熟的种子；若胚珠内含有合子和少数胚乳核，适5％～6％，而刚受精后的胚珠应为8％。 不同发育时期的胚珠对培养基的要求也不同。罂粟授粉后2～4d的胚珠，培养时所要求的培Nitsch培养基上即使附加酵母提取物、水解