用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA制备方法的比较.pdfVIP

维普资讯 270． TianjinMedJ，May2003，Vol31No5 用于 PCR实验的毕赤酵母基因组 DNA制备方法的比较★ 剧 海 梁东春 郭 刚 张镜宇 摘要 目的：比较4种用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA的制备方法 ，以寻求一种稳定、简便的DNA模 板制备方法，用于毕赤酵母重组子的分析。方法：分别用玻璃珠法、煮沸法 、煮一冻一煮法以及直接法制备毕赤酵母 基因组 DNA模板，在相同条件下进行 PCR扩增并比较其差异。结果：煮一冻一煮法与玻璃珠法制备的模板进行 PCR均可取得理想的实验结果。以煮沸法制备模板作PCR时结果受所用模板浓度的影响很大，稳定性较差。直接 法 (即直接用未经处理的菌体作模板)的PCR结果随机性较大，实验结果最不理想。结论：煮一冻一煮法所需时间 少、费用低、操作简便而且结果稳定，是采用毕赤酵母表达系统进行PCR鉴定时制备模板DNA的首选方法。 关键词 毕赤酵母 DNA 聚合酶链反应 ComparisonofFourMethodstoPreparePichiaGenomicDNA forPCR JU Hai，LIANG Dongchun，GU0 Gang，ZHANGJingyu InstituteofEndocrinology，n口 inMedicalUniversity，n口 in300070，China AbstractObjective：Toevaluate4methodstopreparepichiagenomicDNAforPCR．Methods：Amongthe4 method s，onewastoisolateDNA from pichiaafterthemechanicaldisruptionofcellwithglassbeads，another twoweretobo ilthecellsortoboil—freeze—boilthecellsalternately．andthelastonewastousethecellsdirectly f0rPCR withoutanytreatment．Then．PCR wasperformedwithDNA preparedwiththeabovemethodsas templatesandthePCR resultsweresubsequentlyanalyzed．Results：W iththeregardtothestabilityofPCR re— suits．theos called“bo iling—freezing-bo ilingmethod ’’and“glassbeadsmethod ’’werebetterthantheothertwo；the PCR resultswithuntreatedyeastcellastemplateweremostunstableofal1．Conclusion：Givenmanyadvantages suchassimplicity，beingtime—savingandrelativelylow expense，the“bo iling—freezing—bo ilingmethod ’’isvery suitableforthepreparationofDNA templateusedforPCR toidentifyandscreenpichiaintegrants， Keywords pichia DNA polymerasechainreaction 在毕赤酵母表达系统中外源 目的基因必须整 1．1．3 主要试剂：TaqDNA聚合酶、dNTP、DNAMark 合到酵母染色体中才能得以稳定表达。为了能确保 DL2000为大连 TaKaPaBiotech