15个块菌菌株的形态学与分子生物学鉴定.pdfVIP

摘要 块菌(truffles)为一类块状地下共生真菌的通称，而非独立的分类单元。 区的四川、云南和西藏等地，块菌种类非常丰富。与欧美相比我国对块菌的研究 起步晚，在分类鉴定和系统发育关系研究方面多采用传统的形态学方法，研究过 程中不同研究者对同一性状的认知存在主观差异，而且少数形态特征和生理生化 指标随着环境的变化而不稳定，造成块菌分类鉴定上的分歧，这就为块菌资源的 开发、保护和合理利用带来了困难。 采用形态学与分子生物学相结合的方法能够有效弥补形态学鉴定的不足。线 粒体DNA因其具有变异丰富、遗传信息量大等优点，近年来正与核DNA一并用于真 菌分类鉴定和系统发育研究，但在块菌研究中尚未见报道。因此，本研究对供试 的15份块菌标本进行形态学鉴定的基础上，又采用Ms引物和ITs引物对线粒体核 序列，通过相关软件进行序列分析并构建系统关系图。以期明确供试菌株的同源 性和系统发育关系，为当地的块菌资源的保护、开发和可持续利用提供科学的依 据。综合鉴定结果如下： (1通过对供试块菌的形态特征和显微结构的研究，将供试菌株分为中国块 菌、会东块菌、辽东块菌、巨孢块菌、波奇块菌、拟凹陷块菌、喜峰块菌和加卅l 块菌八类。 z—H一2菌株序列用DNAMAN进行同源性分析，结果表明二者序列的同源性达到99％， 说明采用本试验的方法所获得的序列的结果是可靠的。 (3)按照Ms序列构建构建系统关系图。通过树状图可以将供试菌株分为3个类 群。其中类群A中的供试菌株E一2—2与其它供试菌株的亲缘关系均较远，在DNA的 碱基序列上也比其它所有供试菌株约多50个碱基，在形态学上与加州块菌相同。 株z—H一3的形态特征与黑块菌类的印度块菌相同，在核DNA序列系统关系图中它与 自块菌类的波奇块菌聚在一个分支中，且比其它供试菌株约少50个碱基，推测 z—H一3可能为介于黑块菌类与自块菌类问的过渡种类，在此暂定为本研究发现的 新种，命名为拟印度块菌(T．pseu面』月碰G姗)。 (5)通过形态学鉴定，本试验供试菌株B—K一1、x—l一1和K一2—1归为喜蜂块菌类， z—H—l和z—H一2归为中国块菌，但是通过ITs的序列分析发现，与印度块菌(于．』n 颜色、子囊果表面的疣状结构、产孢组织的颜色、菌脉的颜色、子囊孢子的颜色、 子囊孢子的表面纹饰等诸多特征，推测中国块菌同印度块菌应属于同物异名。 (6)对系统关系图中进行整体分析，并结合形态学上的特征可将供试菌株可 分为三个类群类群A：即分支I+Ⅱ+Ⅲ。它们的子囊果表面颜色为褐色至黑褐 色，子囊孢子表面均为刺状纹饰。类群B：即分支Ⅳ，子囊果表面颜色较类群A 的颜色浅，为黄色至褐色，孢子表面纹饰为刺状的拟凹陷块菌类。类群C：即分 支V，除乙H一3外子囊果表面颜色为浅黄色至黄褐色，子囊孢子表面均为明显的 网格状纹饰，而z_H一3的子囊果表面颜色较深，在形态上更接近印度块菌。 关键词：块菌，形态学鉴定。分子生物学鉴定，线粒体DNA序列，核蝣列 Ⅱ Abstract Trumeis血ecommonnaII】eof itisnotthe hypogealfungus shape，aIld wi血clump tax叩unit．T11e in tmf!E1esstudiedt11isarticksarethenumbersof in却endent AscomHot Some ofthe species ge加s have econoIllicvalue．T}lemaindis谢budonsof