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第一部分遗传育种及产业发展趋势
热应激反应是环境持续高温时动物机体为克服不利于其自身平衡和稳定的外界高温环境所产生
的一种非特异性反应：降低采食量，干扰内分泌，影响免疫，进而影响生产繁殖性能。BMY牛作为
在云南地区培育的牛品种，既能适应云南独特的高温高湿的热带、亚热带气候，并具有良好的生长繁
殖性能。如果能找到BMY牛体内与抗热特性相关的基因，将会为我们牛育种提供帮助。HSP70广泛
存在于细胞骨架和核骨架内，作为分子伴侣广泛参与所有细胞内蛋白质的从头合成和定位、成熟、降
解及调节过程12】，显著影响在正常条件下和胁迫条件下生存的细胞功能和代谢。Wei通过构建果蝇
并且非致死性热休克后发育迟缓【3】。由此可见，HSP70在应激恢复中有重要作用。
1材料与方法
1．1实验动物
在夏天炎热的时候，当时南方平均气温30．4度，牛舍平均气温29．8度，超过布仁报道的临界值
(27℃)。随机选取了BMY牛样本8l头，采集血液。
1．2血液样本的处理
使用血液电解质分析仪测定血清钾、血清谷草转氨酶(AST)、血清谷丙转氨酶(ALT)、血清
碱性磷酸酶(ALP)浓度。红细胞自动分析仪测定红细胞钾、血红蛋白浓度。
BMY牛血液样本分两部分处理，抗凝血离心取血清于离心管中，测血清钾、AST、ALT、ALP。
制纯净的红细胞，测红细胞钾。EDTA．Na抗凝静脉血测血红蛋白。
1．3引物选择及PCR反应
Premier
物，它们的不同在于3’非翻译区，为了避免对HSP70．2基因的错误扩增，先设计一对引物覆盖HSP70一l
基因的5’侧翼区，为适应PCR—SSCP的需要，产物长度在200-450bp。
表1 HSP70—1基因5’侧翼区4对引物信息
引物 引物序列 扩增位置 片巽紊小 退各霉度
276。453 178 58
5·．IITR HSP70-P1F TGGGGTCGCAAAGAGTAGG
GGCCGAAATCTCAACAATCC
HSP70_P2 CGCTAAGAACCCAATCAAG诎一记 285 55
GCTGGCAATAGGCAAGAC
HSP70．P3 CTGCGCAGGCGGTGTCCC辩Km 178 61
GGGCTGGTGGGTCGGGACTT
d 197 68
HSP70．P4 GGGGCAGGACTrGAGGCGAAAC㈣ 嘏
(℃GGGTCTGCGGAAGCTGTT
1．4扩增产物电泳及基因型判定
2．0 mmol／L)0．5p
uL：10×bufferuL，dNTP(10 DNA聚合
PCR反应体系：总体积20 L，Taq
酶(5
14．2uL。PCR反应程序为：95℃预变性5min，94℃变性40S，退火40s(温度见表1)，72℃延伸1
rain，30个循环，最后72℃延伸10mill，4C保存。
1．5 SSCP检测
产物变性后点样于10％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，银染显色。根据SSCP图像结果，选取
·39·
《中国畜牧兽医学会养牛学分会20l】年学术研讨会)论文集
母位血姆种肇倒型的蜞’*个体备若h送至r海生I生物L程有限公叫测序
2结果与分析
2．1 HSPT0-l基因5’调拉区引物的SSCP检涮与序列分析
SSCP榆测发现引物Pl、P2和P4
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