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· 52· 黑龙江医药 嘶 iangMedicineJournalVo1.21No.4 2008
三角瓶接种量10%,发酵时间72h。结果见图2。 (2)工艺过程
发酵液用草酸酸化至p .5,过滤后滤液上732型阳离子
交换树脂柱吸附,水洗后用0.5n / 水洗脱,收集p} ~12
^
的洗出液,加适量的活性炭煮沸脱色15mia,滤液在50--60℃
~ 减压浓缩到浑浊,用盐酸调至pI6.0,冷冻过夜,过滤沉淀,加
譬 口3
少量的热水溶解冷却后加一倍体积乙醇,冷冻过夜,滤出沉淀
一 姜 并烘干获得粗品。粗品加少量热水溶解,冷却后加入一倍体
4 o,S 积乙醇,冷冻过夜,过滤沉淀并烘干,获得白色鳞片状的亮氨
、J
姻 酸精品。
’
3.7.2 发酵产物的鉴定
口 生物鉴定:以L一亮氨酸营养缺陷磐 .8为指示菌,用生
图2 菌株 b.145发酵L一亮氨酸过程 长谱法鉴定,在样品结晶周围有指示菌的生长圈出现。
1.pH 2.还原糖 3.菌体生长 4.L~亮氨酸 红外吸收光谱:样品的红外吸收光谱与L一亮氨酸标准
品的红外吸收光谱相符。
从上图可知菌体生长和L一亮氨酸的合成基本上是平行 纸层析:样品结晶的纸层析图谱为单一斑点,Rf值与L一
的,菌体的快速生长期也为L一亮氨酸大量产生期,72h产酸 亮氨酸标准品的相同 溶媒系统为正丁醇:醋酸:水=4:1:
量达最高。
1。
3.7 L一亮氨酸的提取和发酵产物的鉴定
比旋度测定:样品结晶的[a] =+15.2(c=4,~nol/L
3.7.1L一亮氨酸的提取
盐酸)与L一亮氨酸标准品的[a] =+15.8(c=4,nol/L~
(1)技术路线
酸)接近。
(过滤) (吸附)
根据以上结果,确定从发酵液中提取 出的样品结晶为L
草酸 732 褥{离子树脂
发酵液 ——一滤液 吸附物 一 亮氨酸。
PH2.5 4 讨论
(洗脱) (脱色,浓缩) 目前国内外有许多关于亮氨酸发酵的报道,筛选到的L
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