1003吖啶橙_溴乙锭双荧光染色检测细胞凋亡的形态学方法.pdfVIP

1·04 · 中国病理生理杂志 　Chinese Journal of Pathophysiology 　1998 ,14( 1) 　 实验技术 吖啶橙/ 溴乙锭双荧光染色检测 细胞凋亡的形态学方法 ( ) 南京医科大学第一附属医院临床实验研究室 南京 210029 汪承亚 　盛瑞兰 　汪 　凡 　丁小健 　邱宁雷 ( ) ( ) 　　细胞凋亡 apoptosis 是不同于细胞坏死的 Sigma E - 8751 各为 100 mg/ L 的混合染液 , 一种细胞主动性死亡 ,近年已引起人们广泛重 避光保存于室温或 4 ℃,可使用半年以上。 [1 ] 视。Kerr 等 首先用电子显微镜检描述凋亡 取 100 μ μ L 受检细胞悬液 ,加 4 L 上述荧 细胞核浓缩、密度增高 ,细胞膜、细胞器相对完 光染色液 ,轻轻打匀后 ,取细胞悬液一滴滴在 整等形态特征。之后 Wyllie [2 ]等提取凋亡细胞 洁净玻片上 ,加盖玻片后立即置荧光显微镜下 的DNA 作电泳分析 ,见到相差为 180～200 bp 观察。计算受检细胞群体中凋亡细胞百分率 整倍数的 DNA 梯状条带 ,成为鉴定细胞凋亡 时 ,计数 100 或 200 个细胞。凋亡细胞 % = 的经典方法。近期文献报道应用流式细胞仪 凋亡细胞 ×100 % ,计数观察时由 2 人分别 测定受检细胞群体中凋亡细胞的百分率。然 总细胞计数 而 , 电子显微镜,流式细胞仪非一般实验所能 各自进行 , 以减少主观误差。 装备 ,操作较为复杂。DNA 电泳分析则不能估 三、DNA 抽提和电泳分析 : 计细胞凋亡的发生率。 受检细胞 DNA 抽提按标准方法进行[4 ] 。 μ 最近 ,我们在研究人结肠肿瘤细胞的细胞 电泳分析时,取 10 g DNA 在 2 %琼酯糖凝胶 ( ) ( ) 上经 30 V 电泳过夜 约 16 h 左右 。常规 EB 凋亡时 ,采用吖啶橙 acridine orange , AO / 溴 ( ) 染色 ,在紫外光下观察 DNA 电泳条带。 乙锭 ethidium bromide , EB 双荧光染色 ,在荧光 显微镜下观察凋亡细胞核的形态学改变[3 ,4] 。结 结 　　果 果表明这是一种简单可行的检测细胞凋亡的方 　　一、AO/ EB 荧光染色观察凋亡细胞的核形 法。既可早期发现凋亡细胞 ,又可分析细胞凋亡 态特征 : 的发生率。结果可靠,适于一般实验室开展。 人结肠肿瘤细胞株 Vaco 330 等在正常培 材 　料 　与 　方 　法