ELISA检测盐酸克伦特罗残留的方法学评价.pdfVIP

200 2006, Vol. 2 7, No. 09 食品科学 ※分析检验 ELISA检测盐酸克伦特罗残留的方法学评价 陈存社，吕会田，郭凤莲 (北京工商大学化学与环境工程学院，北京 100037) 摘 要：以盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride)重氮化后分别连接到牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制得免 疫原BSA-CL和包被抗原OVA-CL。通过免疫兔获得含有多克隆抗体的血清，经硫酸铵沉淀、纯化，得到兔源抗CL的 抗体，在此基础上建立了间接酶联免疫检测方法。实验结果表明，抗CL抗体最适稀释度为1:1000，羊抗兔酶联抗体 (HRP-IgG)的最适稀释度为1:1500。该检测方法的检测灵敏度为1.452μg/L，线性检测范围为7.26～90.75μg/L。 关键词：盐酸克伦特罗；酶联免疫吸附测定；方法学 . . CHEN Cun-she，LU Hui-tian，GUO Feng-lian Beijing 100037, China) Abstract： 2μ linear from 7.26 to 90.75μg/L. Key words：clenbuterol hydrochloride；enzyme-linked immunosorbent assay；method validation 中图分类号：Q816 文献标识码：A 文章编号： 盐酸克伦特罗(clenbuterol hydrochloride,CL)，是一种 1.1试剂与仪器 人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂，是一种临床上用于 1.1.1试剂 治疗哮喘和支气管痉挛的药物。当其应用剂量达治疗剂 盐酸克伦特罗 ，FW313.7) 量的5～10倍(即＞1g/kg·d)时，CL可增强肌肉发育，降 Sigma公司；牛血清蛋白 公司；鸡 低脂肪沉积，因此又称“瘦肉精”，作为一种非法饲料 卵球蛋白(OVA)北京欣经科公司；HRP-羊抗鼠IgG北 添加剂被许多专业饲养户和饲料加工企业所使用，已经 京欣经科生物技术有限公司；四甲基联苯胺(TMB)北京 [1] 成为了重大的食品安全问题 。 欣经科生物技术有限公司；浓盐酸(36.38%)、H2O2、 酶联免疫吸附检测法(ELISA)是当前盐酸克伦特罗残 NaNO2、(NH4)2SO4、NaOH、Na2HPO4、NaH2PO4均为国 留检测方法中最为常用的一种方法，具有简便、快速、 产分析纯产品；实验用水为双蒸去离子水。 [2] 灵敏、高特异性等优点 。迄今有关ELISA方法学参数的 1.1.2仪器 报道不多。本论文在以前实验的基础上建立了间接ELISA 台式高速冷冻离心机 Hettich公司；Model 3550酶 检测克伦特罗残留的方法，并结合实验数据详细阐述了 标仪 BIO-RAD公司。 ELISA检测数据的处理和分析，分别计算了具有定性含义 1.2方法 的检测低限和具有定量含义的生物检测限，为定量测定