MRP3在多种肿瘤细胞系的表达及意义gao.docVIP

MRP3在多种肿瘤细胞系的表达及意义( 高玮 张辉 （上海同济大学附属东方医院） 摘要：目的 探讨MRP3（multidrug resistance-associated protein 3，MRP3）蛋白在多种肿瘤细胞中的表达及意义。方法 选用七种肿瘤细胞及人胚肾293T细胞，采用抗MRP3的单克隆抗体通过流式细胞仪及western blot方法检测其MRP3的表达，通过RT-PCR检测细胞在mRNA水平的表达情况。结果 MRP3mRNA在三种人胰腺癌细胞中皆有表达，在其他5种细胞无表达，MRP3蛋白在胰腺癌细胞系BxPC-3及AsPC-1中显著表达。结论 MRP3可能以组织特异性的方式在不同肿瘤细胞中表达，BxPC-3和AsPC-1细胞系是体外胰腺癌耐药研究的良好选择。 关键词：多药耐药相关蛋白质类；肿瘤细胞系；表达 中图分类号：（R730.21） 文献标志码：A 文章编号： Expresstion and Significance of multidrug resistance-associated protein 3 in different cell lines GAO Wei, ZHANG Hui, (General Surgery of Dongfang Hospital, Tongji University, Shanghai 200120,China) Abstract: Objective To investigate the expression and meaning of MRP3 in different tumor cells. Methods The monoclonal antibody against MRP3 was used to identify the expression of MRP3 by Western Blot and flow cytometer in seven tumor cells and human embryo kidney cell lines 293T.And RT-PCR was used to detect the mRNA of MRP3 in eight cell lines. Result The mRNA of MRP3 was expressed in three pancreatic carcinoma cell lines.MRP3 protein was observed in BxPC-3 and AsPC-1 cells. Conclusions MRP3 may express in different tumor in tissue-specific manner.BxPC-3 and AsPC-1 may serve as cellular models for in vitro studies on multidrug resistance of pancreatic carcinoma. Key words: multidrug resistance-associated protein；tumor cell;expression 多药耐药相关蛋白（MRP）家族主要参与细胞内外多种复合物的转运，在介导肿瘤药物外排起到了重要的作用，目前已知有9个成员（MRP1-MRP9）[1]，MRP3是其中之一。以往的研究发现，MRP3在多种肿瘤组织如肝细胞癌、胆管癌、胆囊癌、胰腺癌等皆有表达，推测MRP3可能与一些肿瘤的多药耐药（multidrug resistance，MDR）相关。 本研究中，我们通过传代培养了8种不同的细胞系，利用抗MRP3的单克隆抗体，通过RT-PCR、Western blot 和流式细胞仪方法分析MRP3在人胚肾细胞及7种不同的肿瘤细胞系中的表达状况，为进一步研究MRP3蛋白在不同肿瘤介导的耐药作用奠定基础。 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 主要试剂: DMEM、RPMI1640培养基、胎牛血清（Sigma），RNA提取试剂盒（北京天庚生物公司）、鼠抗人MRP3单克隆抗体、鼠抗人MRP5单克隆抗体、鼠抗人β-actin单克隆抗体 (Santa Cruz), RT-PCR试剂盒(TOYOBO)，ECL显色试剂盒(德国DAKO公司)。 1.1.2 实验用细胞：人胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3、PANC-1由中国科学院上海细胞库293T细胞系、肺癌细胞系A549、宫颈癌细胞系Hela、骨髓瘤细胞系TK143、T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat由复旦大学公共卫生临床中心科学研究部提供。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养及处理：将人胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3