应用接头PCR的方法扩增假attP位点.pdfVIP

第 卷第 期 生命科学研究 13 1 Vol．13 No．1 年 月 2009 2 Life Science Research Feb． 2009 第 期 1 应用接头PCR 的方法扩增假attP 位点 欧海龙， 黄 英* （上海交通大学医学遗传研究所，中国上海200040） 摘 要： φC31 整合酶可高效介导外源基因特异、 稳定地与哺乳动物基因组发生重组反应， 基因组中被整合的 位点为假 位点 运用接头 的方法对 整合酶介导的含有 序列及表达绿色荧光蛋白 （ ）的 attP . PCR φC31 attB GFP 载体在牛基因组中的一个新的特异整合位点（假 attP 位点）进行扩增， 并且显示接头PCR 技术在克隆与已知序 列相邻的未知旁侧序列上其具有高效、特异、灵敏等特点. 关键词： 接头PCR ； φC31 整合酶； 假 attP 位点； 牛基因组 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Q75 A 1007-7847 2009 01-0011-05 Amplification of Pseudo attP Site Using Adaptor PCR OU Hai-long ，HUANG Ying* （Shanghai Institute of Medical Genetics ，Shanghai Jiaotong University School of Medicine ，Shanghai 200040 ，China） Abstract ：φC31 integrase can effectively mediate the integration of foreign genes into mammalian genome ， and the site being targeted is called pseudo attP site. An adaptor PCR method is used to amplify a novel pseudo attP site at which a vector bearing attB sequence and GFP gene site-specifically integrated mediated by φC31 integrase，and the results show that the adaptor PCR is a reliable ，efficient ，specific technique for detecting pseudo attP site. Key words ：adaptor PCR ；φC31 integrase ；pseudo attP site ；bovine genome （Life Science Research ，2009 ，13 （1）：011～015） 利用已知序列获得旁侧的未知序列的方法 进行连接反应，再用根据已知序列上设计的引物 有多种，在PCR 技术发明以前，主要通过筛选