实时定量PCR检测骨髓间质干细胞及肿瘤细胞BMI1基因.pdfVIP

临床检验杂志 年第 卷第 期 ， ， ， 文章编号： （ ） 中图分类号： 文献标识码： ·研究生园地 · 实时定量 检测骨髓间质干细胞及肿瘤细胞 基因＊ 姜润秋，许文荣，朱伟，钱晖，曹维克，韩崇旭，毛飞，严永敏（江苏大学医学技术学院，江苏镇江 ） 摘要：目的 建立 基因（ ）表达的实时荧光定量 ，利 用该方法在基因转录水平上研究 在间质干细胞（ ）及肿瘤细胞中的表达水平。方法 通过 ， 克隆， 等方法精确测定并比较 基因在胚胎 、成人 、 （人肺腺癌细胞株）、 （人结肠腺癌细胞 株）、 （人髓系白血病细胞株）、健康人外周血淋巴细胞以及白血病细胞中表达水平。结果 测定绘制 基因的标准 曲线（相关系数! ），胚胎 中 的表达水平高于成人 ，慢性粒细胞白血病（ ）和慢性淋巴细胞白血病 （ ）中 的表达量分别高于急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病， 和 中的表达量高于 ，健康人 外周血淋巴细胞中 的表达明显低于慢性髓系白血病（ ）。结论 定量测定 的 方法较稳定、 准确。 基因可以作为某些肿瘤特别是白血病治疗的靶点，其表达水平可作为判断肿瘤恶性程度的参考指标。 关键词： ；骨髓间质干细胞；肿瘤；实时定量 是一个与干细胞和肿瘤干细胞相关的基 的正常成年人外周血，按白血病患者骨髓细胞处理 因，它是维持干细胞和肿瘤干细胞生长所必需 方法处理后备用。 ［ ］ 的 ，国内至今尚无关于 基因的研究性报 总 提取和逆转录 分别从胚胎和成人骨 道。本文旨在建立 基因实时荧光定量 髓间质干细胞、肿瘤细胞、白血病患者骨髓细胞和人 （ ）检测的方法并探讨其在间质干细 外周血淋巴细胞中操作提取总 并合成 。 胞、白血病细胞以及各种肿瘤细胞株中的表达。 用 试剂（ 公司）严格按说明书操作。 材料和方法 引物设计 ， （内参）基因的引 细胞及细胞培养 物（上海生工公司合成）和 扩增产物长度见表 分离培养 按照本实验室已经建立的 ［ ］ 。其中 基因有两种片段长度，长片段（ 成人和胚胎 分离培养方法 。 肿瘤细胞株 （人肺腺癌细胞株）， ）用于装入 克隆载体，短片段（ ）用于 （人结肠腺癌细胞株）， （人髓系白血病 定量 扩增。 细胞株），购自中科院上海细胞研究所。 表 ， 基因引物序列 白血病患者骨髓 由江苏省常州市第一人 基因 引物序列（ ） 扩增长度 民医院和江苏大学附属医院提供，其中急性髓系白