树突状细胞转移癌融合疫苗治疗转移性结肠癌研究1.docVIP

树突状细胞/结肠转移癌细胞融合疫苗治疗转移性 结肠癌的动物实验研究 孙新平,丁晓煜,赵文鹏,朱宗迅,李渊,张天锋（武警甘肃总队医院医务处 甘肃 兰州 730050） 【摘 要】目的：通过建立人免疫重建荷人结肠癌皮下种植瘤严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型，研究DC/结肠癌融合疫苗对人转移性结肠癌的发展及预后的影响。方法：应用腹腔注射法对严重联合免疫缺陷SCID小鼠注射人外周血淋巴细胞（hu_PBL）免疫重建后，皮下注射法建立荷人结肠癌皮下种植瘤模型。应用聚乙二醇（PEG) 制备DC/SW620融合疫苗。将DC/SW620融合疫苗于左、右后足底、尾根部皮下三点注射在人免疫重建的SCID小鼠结肠癌皮下移植瘤模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中人IgG含量；通过直接测量法观察人结肠癌皮下种植瘤成瘤性和小鼠生存期。结果：融合疫苗治疗组的皮下肿瘤体积生长速度慢于其他各对照组；融合疫苗治疗组生存期为（109.00±17.17）d，明显长于单纯制模组（55.67±12.03，P 0.001）、免疫重建组（81.83±9.06，P 0.001）、肿瘤细胞疫苗组（87.33±12.85，P 0.01）。结论：DC/SW620融合疫苗可抑制肿瘤生长，改善预后，DC/SW620融合疫苗比肿瘤细胞冻融物免疫治疗效果更佳。 [关键词结肠癌；树突状细胞；融合；( IgG 1μg/ ml)的C.B17/SCID纯系小鼠，雄性，4~6周龄，30只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于无特殊病原体（SPF）环境（北京大学医学部动物实验中心），饲料、饮水、垫料等均经无菌消毒。人结肠转移癌细胞株SW620由上海细胞所购入dmax和最短径dmin，体积V=0.52×dmin2 ×dmax [6]。记录各组小鼠的生存期。 1.2.5免疫重建效果的测定 每组每只小鼠在第5周[7]时剪尾取血20 μL/只，分离血清，用ELISA方法检测人IgG含量。 1.2.6统计学处理 利用SPSS10 For Windows软件进行单因素方差分析。当P0.05认为有统计学意义。 2结果 2.1用腹腔注射法成功建立模拟人类免疫功能的模型 应用ELISA方法在免疫重建后第5周的小鼠血清中检测到了人IgG，C组、D组、E组阳性均为6/6。但各组之间IgG水平无显著性差异（表1）。 表1 SCID小鼠血清中人IgG表达情况（ELISA法） 分组 n 人IgG水平μg/ml A(假手术组) 0/6 0 B(单纯制模组) 0/6 0 C(免疫重建组) 6/6 335.91±58.66 D(融合疫苗治疗组) 6/6 326.27±48.23 E(肿瘤细胞疫苗组) 6/6 337.07±86.42 2.2 DC/SW620细胞融合瘤疫苗可抑制皮下肿瘤的生长，明显延长治疗组的生存期。 2.2.1每只建模小鼠都长出了皮下瘤（图1）。 图1 DC/SW620融合疫苗对结肠癌皮下种植瘤的影响。（A假手术组B单纯制模组； C免疫重建组； D融合疫苗治疗组； E肿瘤细胞疫苗组） DC/SW620融合疫苗治疗组曲线低平，提示与其他3组相比，此组小鼠皮下瘤生长受到抑制。（图2） 图2 DC/SW620融合疫苗对结肠癌皮下种植瘤生长的影响。（B单纯制模组； C免疫重建组； D融合疫苗治疗组； E肿瘤细胞疫苗组） 2.2.3 DC/SW620融合疫苗可明显延长荷人结肠癌皮下种植瘤小鼠生存。融合疫苗治疗组生存期为109.00±17.17天，明显长于单纯制模组（55.67±12.03，P=0.000）、免疫重建组（81.83±9.06，P=0.002）、肿瘤细胞疫苗组（87.33±12.85，P=0.010）。（表2，图3） 表2 DC/SW620融合疫苗对结肠癌皮下种植瘤模型生存的影响 分组 n 生存期（天） P值 B(单纯制模组) 6 55.67±12.03 C(免疫重建组) 6 81.83±9.06 D(融合疫苗治疗组) 6 109.00±17.17 P1=0.000* P2=0.002** P3=0.010*** E(肿瘤细胞疫苗组) 6 87.33±12.85 0.000# *与B组比较 **与C组