葛根提取物诱导HL-60细胞凋亡的实验的研究.pdfVIP

葛根提取物诱导HL-60细胞凋亡的实验研究 摘要 leukemia黼 是造血干细胞的恶性克隆 生疾病。发病 急性髓细胞白血病 acutemyeloid 时骨髓中异常的原始细胞及幼稚细胞大量增殖，并广泛浸润肝，脾，淋巴结等各种脏器，使 正常血细胞生成减少，产生相应的症状，主要临床表现为贫血，出血，感染，肝脾淋巴结肿 大和骨关节疼痛等征象。急 生白血病病程急，自然病程短。现代医学多采用诱导分化、联合 化疗、骨髓移植等治疗。 细胞凋亡是基因控制下的细胞程序化死亡，在疾病发生，发展中有重要作用。细胞凋亡 受阻是急 生白血病发病重要因素，因此，诱导白血病细胞凋亡是AML治疗的重要手段之一。 m御细胞作为细胞诱导分化或凋亡研究的模型已为人』门所熟知，而Bcl-2基因、P53基因、 死亡受体及其配体Fas／FasL都是与细胞凋亡密切相关的重要信号分子。 血复康是江苏省中医院血液科于1989年根据中医解毒活血法独创的复方制剂，主要由 青黛、莪术、葛根等中药组方。临床主要用于治疗良 生粒细胞白血病 chronicmyelogenous 血复康能抑制K562细胞 人睫 生粒细胞白血病红白血病变细胞株 增殖及诱导细胞凋亡， 且诱导凋亡的途径不尽相同。本研究试图从蛋白水平进一步研究血复康单药成分葛根提取物 葛根素和大豆甙元诱导HL-60细胞凋亡可能的分子机制。 实验目的：1．研究不同浓度的葛根素和大豆甙元对HL-60细胞凋亡的影响；2．细胞凋亡 导HL-60细胞凋亡可能的分子机制。 实验方法-以HL．60细胞为研究对象，明縻①不同浓度葛根提取物葛根素 0mmol／L、 0．125mmol／L、0．25mmol／L、0．5 mmol／L、0．025mmol／L、0．05mmol／L、0．1mmol／L、0．2mmol／L 作用48小时后，Hoechst33258 blot 检嘲4Bel-2、P53、Fas／FasL蛋白的变化。 实验结果：1．Hoechst染色后荧光显微镜观察显示，分别以不同浓度葛根素和大豆甙元 处理组处理HL一60细胞48小时后，便可检测到核固缩及凋亡小体，且以最高浓度处理组最 为明显；2．流式细胞仪检测细胞凋亡率：分别以不同浓度葛根素和大豆甙元处理组处理 3．Westem HL-60细胞48小时后，细胞凋亡率与浓度呈正相关； blot结果：①葛根素和大豆 甙元浓度依赖组Bcl-2蛋白均有高表达，葛根素不同浓度处理后bcl-2表达随浓度依赖性下降， 大豆甙元细Bcl-2蛋白表达无浓受依赖性关系；②不同浓度葛根素和大豆甙元处理m．枷细 葛根提取物诱导FIL-60细胞凋亡的实验研究 但无浓度依赖性关系。⑧不同浓度葛根素和大豆甙元处理组，P53蛋白均有低表达，药物处 理组和对照组P53表达无明显变化。 结论：1．不同浓度大豆甙及葛根素处理组均能抑制m，60细胞增殖并诱导细胞凋亡。 细胞凋亡。3．葛根素和大豆甙元可部分上调Fas／FasL蛋白表达水平，可能通过激活死亡受 体及其配林诱导细胞凋亡。 关键词： 几—50细飚血复康；葛根素；大豆甙元；细胞凋亡 EXPERIfⅥENTALSTUDIESoNAPOPTOSIS0Fm—劬CELLS 州DUCEDBYGEGENEXTRACTIVE Acute kind diseasein stem a of clone myeloidleukemia AML ismalignant haemopoetic ofabnormal and cells in infiltrate cells．plenty archaeoeytesjuvenileproliferatemarrow,and inallkindsof suchasliverand the generally organs spleen,andlymphnodes,andsupress clinicalmanifestationsare haematopoiesis,thenemergepropotionalsyptoms．Themajor anaemia, and lymphnodes,bonespain arthrosis c0IⅧ鬻ofdiseaseofAMLisshort．Mostoftheuntreatedwilldiein3 p￡Iill．The patients suchasinductionand months．Manytherapies differentiation,combination marrow and modifiersareusedinmodem transplantation,immunesuppressionbiologicalresponse me