猕猴淋巴细胞第一次分裂时期的确定和双着丝点染色体频率的改变.pdfVIP

遗传 HCGREDITAS(Beijing) 3(1）· 14一161981 8t猴淋巴细胞第一次分裂时期的确定和 双着丝点染色体频率的改变 苏瑞珍 李玉环 何 建 （中国科学院生物物理所，北京｝ 目前人类正处在广泛利用原子能的新时 第二种方法：此法1973年为Latt等Lqj山－ 代，因此就难免不受到电离辐射的损伤。若一 首创。作者们先在含有5-澳脱氧尿pwAiL核普 旦不幸受到电离辐射的照射，必须要知道所接 (5-Bromodeoxyuridine,简写为BrdUrd）的培养 受的剂量的大小，然后才能采取适当的医疗措 基中，培养人类淋巴细胞两个周期，再用 施。国内外现已广泛应用外周血淋巴细胞体外 Hoechst33258荧光染料染色，最后在荧光显微 培养，统计其染色体畸变率来估计受照剂量大 镜下观察中期染色体的姐妹染色单体，他们看 小。许多作者认为这样所得到 的染色体 畸变 到两个单体呈现出不同强度的荧光。 率可以作为生物剂量计。但一些实验结果证 在1974年Korenbergtsl等改进了上述方 明1,〔21培养时间的长短，染色体畸变率也就有 法。培养的标本经Giems。染色后，在普通光学 所不同。例如人类淋巴细胞培养72小时的比 显微镜下即能分辨出姐妹染色单体之间深浅不 培养48小时的，其染色体畸变率降低约两倍。 同的颜色。关于BrdU的作用机制，许多作者认 其下降原因是由于培养中的淋巴细胞第一次分 为是 BrdUrd掺人细胞后替代染色体上的DNA 裂到第二次分裂时畸变染色体数量丢失的结 链中的胸腺嚓陡，而在 DNA半保守复制时。不 果。因此，随着培养时间的延长，将会导致染色 同的姐妹染色单体由于BrdU的难（染）作用，对 体畸变率的下降，从而影响到过去的一些实验 Giems。染料的亲和力不同而染色的深浅彼此各 的结果。为此有必要严格控制所观察的细胞， 异。 并规定畸变率的统计应在细胞的第一次有丝分 根据两个染色单体全染，两个单休中只有 裂时期。 一个单体染上色，或全数染色体中只有四分之 确定细胞分裂周期的技术方法，目前所采 一染色，人们可以简单而精确地辨别出细胞群 用的有两种： 中某一个细胞依次是处在第一次、第二次或第 第一种方法：Taylor}3，于1957年把”H一胸 三次有丝分裂时期，同时根据不同培养时期各 腺fw1AZ核普掺入植物细胞染色体，首次用放射 次中期细胞百分数的多少，从而推算出细胞分 自显术发现姐妹染色单体互换。此后不少学者 裂周期的长短。 用同样的方法对动物和人类染色体进行研究， 由于偷猴在演化系统中和人类相接近，因 进一步阐明单个染色体内DNA合成的时间次 此利用fi猴进行放射生物学实验以及作生物剂 序及其怎样进一步分配到子细胞中去的问题。 量计的理论和实验研究，对人类辐射损伤极有 但由于放射自显术仅能观察到一个周期的 DNA复制，并且技术操作并不简易，因此，在 Su Ruizhen ctal.:Determination of the FirstMi- toticTimeandChangeoftheDicentricChron,o- 常规应用方面受到一定的限制。 someFrequencyofLymphocytesinMacacatnulattrt 14 参考价值。称猴淋巴细胞分裂周期迄今还不曾 意），水洗，二甲苯透明，树胶封片。 看到有人确定和报告过。木实验中我们用BrdU 方法来确定培养中的称猴外周血淋巴细胞所处 结 果 和 讨 论 的分裂时期，同时记录在件射线照射后，从第 狱猴外周血淋巴细胞在PHA刺激下。大多 一次到第二次分裂时双着丝点染色体畸变率下 数细胞都能转化并进行有丝分裂。 当B