伪狂犬病毒gG基因的表达及gG-LAT诊断方法的建立.pdf

畜牧兽医学报， ， （）， )22**+’ 1)@1- !#$%#’()$’($#*++#,)($-()($ 伪狂犬病毒 基因的表达及 ! #$%诊断方法的建立 ! ! 唐 勇，陈焕春 ，覃雅丽，何启盖，肖少波 （华中农业大学畜牧兽医学院，武汉 ） !##$# 摘 要：依据伪狂犬病病毒（ ） 株序列合成针对 基因的特异性引物，从 鄂 株 %’()*+,-.’/.+(%0/ 0.1’ 3 %0/ 4 2 中扩增出 基因，并将其克隆到 质粒中并测序，用 和 酶切，将 基因融合到 3 67(’1+.8 3 ?@ 2 5 5!9:; 9,1 .=)# 2 5 质粒中 启动子下游，构建成原核表达质粒 ，结果并未获得表达。再用 切除 基因后小 AB, ? ?@AB,@3 D*8 3 $ 5 2 C 2 半部分片段，构建成原核表达质粒 ，使其在 （ ）中以 诱导表达，经 分 ?@AB,@3 E1*7.6FACG H%?3 9G9@%43 5 2 A 析，表达特异带为 ，斑点杂交证实表达产物具有抗原性。表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂 !$:G, 解液的上清之中，上清经饱和硫酸铵溶液沉淀，透析， 浓缩， 分析表明，经初步纯化的表达产物可 %3A#### FH94 与抗 猪血清发生特异性免疫反应。用该产物致敏空白乳胶建立 乳胶凝集试验（ ），检测 份血清， %0/ 3@ 3@F4? !# 2 2 结果表明 能区分 基因缺失疫苗活苗免疫猪与自然感染野毒的血清学阳性猪，且特异性强、敏感性高。 3@F4? 3 2 2 关键词： ； 基因表达；大肠杆菌； ； %0/ 3 3@FH94 3@F4? 2 2 2 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） 9IBAJC 4 #KKLKMK!A###CL##$AL#I 伪狂犬病是危害养猪业的烈性传染病，其病原