《诊断学》 第二节 流式细胞术及其临床应用.pdfVIP

第二节 流式细胞术及其临床 应用 一、流式细胞术 流式细胞术 （flow cytometry ，FCM）是一种集细胞生物 化学技术、单克隆抗体技术、激光技术、流体力学、电子技 术、计算机技术、分子生物学、临床医学等理论于一体的现 代分析技术；能够对细胞或微球的物理、生理、生化、免疫、 遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测， 并在必要时进行分类收集的多参数检测细胞分析技术，使用 的是流式细胞仪 （flow cytometry ）。 二、流式细胞仪组成及其工作原理 流式细胞仪由流动室及液流驱动系统、激光光源及光束 形成系统、光电检测及信息处理系统和细胞分离纯化系统等 1 部分组成。经染色的细胞或微球在悬液中以单行流过高强度 光源的焦点，单个细胞在高压氧压力下流速极快，每秒可通 过 5000～10000 个细胞。当细胞或微球经过焦点时，发出一 束散射光和 （或）荧光，并经过滤光镜系统收集到达一个光 电检测器 （光电倍增管或一个固态装置），光检测器把光信号 定量转化成电信号，经数字转换器进行数字化后而成整数， 然后进行电子存储数据（图4-10 一2 ）。数据可以调出，方图、 二维散点图、等高线图、灰度图以及三维图等多种形式显示、 分析。流式细胞仪可对感兴趣的细胞进行分选。细胞的分选 是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上 配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为 均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液 滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板 时，在高压电场的作用下偏转，落人各自的收集容器中，不 予充电的液滴落人中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 三、流式细胞术的临床应用 近年来，随着流式细胞仪性能的不断改进、测定方法与 技术的迅速发展、高质量试剂的研制，使得流式细胞技术已 在基础医学、临床医学及科学研究中有着广泛的应用。尤其 是流式细胞仪迅速进入临床实验室，一些检验项目已成为辅 助临床疾病诊断、选择治疗方案、预后判断等方面的重要手 段。 2 （一）免疫学 利用 FCM 可进行免疫活性细胞的分型与纯化、淋巴细胞 亚群与疾病关系的分析；免疫缺陷病如艾滋病的诊断；器官 移植后的免疫学监测等。 流式细胞膜免疫表型分析是流式细胞技术最主要的分析 内容之一，很多细胞亚群的检测均是以膜免疫表型为主，如T 、 B 淋巴细胞和NK 细胞分析等。 流式细胞技术可对混合细胞群体中亚群细胞进行分类检 测，如淋巴细胞可依其表面标志的不同分为T 淋巴细胞 （CD3 ＋）、B 淋巴细胞 （CDl9＋）、NK 细胞 （CD3- ／CDl6＋56＋），T 淋 巴细胞又可进一步分为辅助／诱导T 淋巴细胞 （CD3＋ ／CD4＋ - ＋ + - ／CD8 ）和抑制／细胞毒T 淋巴细胞（CD3 ／CD4 ／CD8 ）等。 目前淋巴亚群细胞分类多以相对百分比表达结果，但由于百 分比只能代表每种细胞在混合细胞群体中所占的比例，并不 能体现在单位体积血液中的绝对数量，而临床一些疾病的诊 断需要考虑细胞的绝对数量，如艾滋病患者的血液中辅助／ ＋ ＋ - 诱导T 细胞 （CD3 ／CD4 ／CD8 ）200 个／μ l，而仅有HIV 感染而未发病者则200 个／μ 1。淋巴细胞亚群的绝对计数在 国外实验室早已成为常规检查，而目前国内开展较少，但是 由于其检测的重要性，淋巴细胞亚群的绝对计数是实验室检 测发展的趋势。 FCM 通过对人白细胞抗原 （HLA）配型的测定可以为异体 3 干细胞移植病人选择出最合适的供体并进行骨髓或器官移植 后免疫状态的监测。造血干／祖细胞移植加强烈化疗是治愈 某些难治性疾病的有效方法；它