男性不育临备床检测新选择精子DNA完整性试验.pdfVIP

70 ChineseJournalof V01．23No．12009 Andrology 男性不育ll备床检测新选择：精子DNA完整性试验 卢 慧‘ 刘玉林综述 李 铮”审校 上海交通大学医学院附属仁济医院(上海200001) 精了最重要的使命是携带DNA并与卵子结合， 长则是限制它们用于男性不育临床检测的主要障碍”’。 使后代保有父亲的一半遗传信息。与其它细胞不 三、精子完整性检测的新方法一染色体扩散试验 同，精子的发生经历了有丝分裂和减数分裂，这一 2003年Ferndndez等…’报道了一种半定量的精子 过程中染色体的变化更为复杂“1。在精子形成阶段， 完整性检测方法，该方法最大的优点足快速且成本 精子细胞的核蛋白组型发生了转换，即与DNA相伴随 低廉。主要步骤如下：将未经同定的精子与琼脂糖 的组蛋白逐渐被龟精蛋白替代。精子穿入卵母细胞 混合冷却后制成凝胶，酸化处理使DNA变性；在裂 后，精核核膜破裂，DNA解螺旋，同时鱼精蛋白又 解液的作用下，破坏细胞膜结构；最后对核酸进行 重新被替换成组蛋白“1。这一系列复杂的变化有精子 染色。在显微镜下可观察到未发生DNA断裂精子的 DNA损伤的可能性。然而，目前常用的男性不育临床 染色体扩散开来，使头部出现一个晕圈。DNA断裂 检测项目尚不能反映精子DNA损伤的情况。因此，精 者晕圈的半径减小。断裂程度越严重，晕圈越小， 子DNA完整性检测成为男性不育临床检测的新选择， 直至没有晕圈。对一份标本中的至少500条精子的晕 chromatin 圈半径与核半径之比进行分析，得出该标本的精子 尤其是染色体扩散试验(sperm dipersiontest， ScD)，因其检测快速、费用低廉而备受推崇。 DNA断裂指数(DNA index，DFI)。 fragmentation 一、精子DNA完整性与男性不育 值得注意的足，当缺少酸化步骤时，不管是否有DNA 日常生活中，许多环境因素和疾病因素可诱发 断裂发生，所有精子头部均可观察到晕圈。 精子DNA断裂：有害射线辐射、空气污染、环境 (一)SCD的准确性 毒素、吸烟、吸毒、精索静脉曲张、生殖道感染、 检验员间的个人误差是半定量试验的聿要误差来 激素水平异常、睾丸温度过高、高热等等1。精予 源。实验证明，无论是使用计算机自动识别还是不 DNA损伤可影响受精率、胚胎发育、受孕率，引 同的观察者在明场显微镜下的手工评分，SCD评分 起习惯性流产，甚至可能严重影响子代健康”1。辅 结果的变异系数都小于3％…。因此，尽管是一种半 助生殖技术的发展提供了一些可能途径：卵胞浆单 定量检测，但SCD结果相对客观准确。 精子注射(ICSI)可以提高受精率；囊胚培养则有 SCD对毒素反应显示出剂量依赖效应。使用经不同 助于选出卵裂正常、质量较好的胚胎用于移植”1。 浓度的亚硝基铁氰化钠(一种NO供体，浓度分别为0、 因此，对DNA断裂的检测可用于评价男性的牛育能 60、125、250及500laM)窜温孵育1h后的精子进行 力、预测人工授精、体外受精(IVF)及ICSI的SCD榆测，发现精子DNA断裂程度随亚硝基铁氰化钠 成功率，据此帮助患者选择治疗方案¨’。 浓度增加而增加，且呈现剂量依赖效应。有趣的是， 二、几种经典的精子DNA完整性检测方法 这种Ⅱ硝基铁氰化钠导致的DNA断裂加剧足上述几种经 经典的精子DNA断裂检测方法主要有：精子染 典精子DNA断裂检测方法无法检测到的。这可能足由 chromatinstructure 于前述的经典方法直接检测的是DNA变化，而SCD似 色体结构分析(sperm