胆固醇吸收蛋白——降脂治疗的新靶点.docVIP

胆固醇吸收蛋白——降脂治疗的新靶点 　　作者：李辉,刘德平　　作者单位：卫生部北京医院心内科 　　【关键词】 胆固醇吸收蛋白,降脂 　　高胆固醇血症是动脉粥样硬化形成的重要危险因素，大量的临床实验证实，降低血胆固醇可以延缓动脉粥样硬化的进展，甚至逆转动脉粥样硬化。人体内胆固醇的来源主要通过自身细胞的合成和吸收膳食及胆汁中的胆固醇两个途径，胆固醇的清除主要通过合成胆汁酸和从胆汁排泄这两个途径。他汀类药物通过抑制3羟基3甲基戊二酰辅酶A(HMGCoA)还原酶的活性，减少体内胆固醇的合成，已经在临床实践中得到广泛的应用。胆固醇吸收抑制剂依折麦布(ezetimibe)则是通过抑制胆固醇的吸收发挥作用[1]。 　　2001年van Heek等[2]发现依折麦布可以选择性的抑制小肠上皮细胞对于胆固醇的吸收，但是对于脂溶性维生素、三酰甘油、胆汁酸的吸收没有影响。它可以抑制约50%通过饮食吸收的胆固醇，并使血LDL-C水平降低。 　　1 NPC1L1的发现和结构 　　2004年Altmann等[3]通过染色体生物信息系统证实了药物的分子学机制，其作用靶点是胆固醇吸收蛋白(NiemannPick C1like 1，NPC1L1)，它的氨基酸结构有42%与NiemannPick C1型蛋白 (NPC1)相同，这也是它名称的来源。NPC1蛋白是细胞内胆固醇转运的载体，是常染色体隐性遗传的致命性脂质沉积和神经变性NiemannPick病C1型的病因[4]。在人类和啮齿类动物，NPC1L1蛋白和mRNA主要表达在小肠和肝细胞内，在其他组织中几乎不表达或10%小肠细胞的表达。小肠标本的免疫荧光染色显示，NPC1L1蛋白主要位于小肠细胞的刷状缘，在空肠近段的上皮细胞中含量最高[3,5]。电子免疫细胞化学显微镜检查显示，NPC1L1蛋白在细胞结构中主要位于微绒毛、溶酶体、内涵体和线粒体的膜上[4]。它在结构上具有13个跨细胞膜区域，并具有固醇感知区域[6]。 　　2 NPC1L1的功能 　　应用同源染色体重组技术制成NPC1L1基因敲除的小鼠(NPC1L1-/-)，给予放射标记的胆固醇饮食，肠道吸收的胆固醇较野生型小鼠(NPC1L1+/+)减少70%，减少程度等同于应用依折麦布治疗的野生型小鼠。NPC1L1-/-小鼠应用依折麦布后肠道胆固醇的吸收没有进一步减少，并且这种小鼠不会出现高胆固醇饮食导致高胆固醇血症的现象[3]。NPC1L1蛋白同样也是植物固醇吸收的转运载体，NPC1L1-/-小鼠植物固醇吸收同样减少，减少的量与NPC1L1+/+小鼠应用依折麦布后减少程度类似。应用依折麦布标记葡糖苷酸的技术显示，药物特异性地结合到NPC1L1+/+小鼠和人的小肠上皮细胞刷状缘，而在NPC1L1-/-小鼠没有显示药物的结合[7]。从而证实，NPC1L1蛋白是肠道依折麦布敏感的胆固醇和植物固醇吸收途径的转运载体。 　　在体外试验中也得到同样的结论，CaCo2细胞是人结肠癌上皮细胞，其标志酶的功能表达及通透特征与小肠上皮细胞类似，因而被大多数试验采用作为研究小肠上皮细胞转运和代谢的体外模型。应用RNA干扰技术敲除NPC1L1基因的CaCo2上皮细胞相对于正常对照的CaCo2上皮细胞，其胆固醇的摄取量减少30%以上[5]。应用转基因技术使CaCo2细胞高度表达NPC1L1蛋白后，对于培养基内的胆固醇的摄取明显增加。在培养基中加入药物依折麦布后，这些细胞对于胆固醇的摄取明显减少，并且随着药物浓度的升高，单位时间内胆固醇的摄取量逐渐降低[8]。 　　肝细胞也表达NPC1L1蛋白，通过转基因技术让小鼠肝细胞高度表达人NPC1L1蛋白时，胆汁内胆固醇的浓度降低至对照组野生型小鼠的10%～20%，但胆汁内磷脂和胆汁酸的浓度没有改变，同时血中的胆固醇浓度升高30%～60%。当这种小鼠应用依折麦布治疗时，胆汁和血中的胆固醇浓度恢复到正常对照小鼠的水平[9]。这表明肝细胞的NPC1L1蛋白调节胆汁中的胆固醇浓度，决定胆固醇在胆汁中的排出量，从而参与调节体内的胆固醇稳态，也是依折麦布的作用靶点。 　　3 NPC1L1活性的调节及其影响 　　NPC1L1蛋白的细胞表达和活性受到一些因素的调节，目前证实胆固醇浓度是最主要的调节因子。当食物中胆固醇含量高时，小鼠的小肠上皮细胞NPC1L1蛋白的表达较正常饮食的小鼠下调[10]。机制可能是通过细胞核的胆固醇感受器肝脏X受体(LXR)，其在调节细胞内胆固醇、脂肪酸、葡萄糖的动态平衡中发挥了重要作用，主要表达在肝脏、小肠、肾脏、脂肪等器官和组织。当细胞内胆固醇浓度升高时，LXR激活并导致小肠上皮细胞的NPC1L1 mRNA和蛋白表达下调[1