总结总直接胆红素的检测方法.docVIP

血清总胆红素和胆红素测定目前测定血清胆红素的方法主要有重氮试剂法（包括改良J-G法、二甲亚砜法、二氯苯重氮盐法和2，5二氯苯重氮四氟硼酸盐法等）、胆红素氧化酶法、钒酸盐氧化法、高效液相色谱法、导数分光光度法、经皮胆红素测定法以及直接分光光度法等。改良J-G）法实验原理 试剂(ml) 总胆红素管 结合胆红素管 空白管 血清 0.2 0.2 0.2 咖啡因-苯甲酸钠试剂 1.6 - 1.6 氨基苯磺酸溶液 - - 0.4 重氮试剂 0.4 0.4 - 混匀，总胆红素管置室温10min，结合胆红素管置37℃水浴准确放置1min，按下表继续操作： 充分混匀后，用空白管调零，于波长600nm，读取总胆红素管和结合胆红素管吸光度，在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。 2．0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH4.5)。 3．BOD溶液 如系冻干品，按说明书要求复溶，但复溶后冰箱保存不宜过长(约可保存1周)，如系液体(可能含有甘油)，置4℃冰箱可保存较长时间，BOD贮存溶液的酶活性一般在数千至1万～2万U/L，BOD工作液酶活性可按反应液中BOD终浓度达0.3～1.0U/ml计算。 4．总胆红素标准液(342μmol/L) 按胆红素测定J-G法中方法配制，或市售合乎要求的标准液。 5．结合胆红素标准液 将DTB配于胆红素浓度可忽略不计的人血清中，或用冻干品按说明书要求重建。配制后分装于聚丙烯管内，－70℃保存，可稳定6个月。冻干品未重建前置低温中，至少稳定1年。 加入BOD工作液后立即混匀，置37C水浴5min，用分光光度计，在450nm波长，去离子水调零，读取各管吸光度(A)。用于对照管的比色杯与非对照管的比色杯不得混用。 钒酸盐氧化法(试剂盒) 原理 在PH=3左右，有表面活性剂和间接反应胆红素抑制剂的条件下，样品中的直接胆红素被氧化剂钒酸钠氧化为胆绿素。胆红素的黄色特异性吸光度下降，通过测定钒酸盐氧化前后吸光度的变化，计算样品中直接胆红素的含量。 实验方法 试剂：柠檬酸缓冲液100mM 表面活性剂2mmol/L 磷酸缓冲液10mM 偏钒酸钠4mmol/L 适用于半/全自动生化分析仪，两周内用完。 样本/标准/水 sample volume μ1 14 试剂1（R1） Reagent 1 μl 280 样本+R1 在37保温60秒，记录吸光度值A1 试剂2（R2） Reagent 2 μl 70 在加入R2 保温300 秒后，记录吸光度值A2。 主波长 main wavelength nm 450 副波长 sub wavelength nm 546 反应类型 reaction type ? 两点终点法 反应方向 reaction direction ? 降反应(-)