中药指纹图谱与研究技术(中华中医药学会).ppt

内 容 一、中药指纹图谱技术概述 2. 国内中药质量评价现状 植物学方法： 原植物鉴定，显微鉴定等 植物化学方法： 理化鉴定 分析化学方法： 仪器分析，色谱分析等 药理学方法： 生物鉴定法，生物等效等 分子生物学方法: DNA指纹鉴定 本文观看结束！！！ 图9 上海制首乌指纹图谱 北京良方药业制首乌 北京金象药店制首乌 北京寿春堂药店制首乌指纹图谱 （6） 流动相（梯度表）的选择 主要影响因素 1. 起始浓度 2. 梯度速率 3. 流速 时间∕min 水%（H+/OH-）* 乙腈%* Ⅰ ? 0 100 0 55 20 80 60 0 100 Ⅱ ? 0 100 0 40 70 30 60 60 40 Ⅲ ? 0 80 20 40 60 40 60 50 50 Ⅳ ? 0 60 40 40 30 70 60 0 100 * 为体积百分比（V/V） 指纹图谱流动相梯度优化 * 为体积百分比（V/V） 梯 度 表 初始色谱条件 时间（min） 水%（H+/OH-） 乙腈% 0 100 0 60 0 100 时间（min） 水%（H+/OH-） 乙腈% 0 100 0 55 20 80 60 0 100 初始色谱条件的设定依据及目的 依据：化合物极性大小。如未知时，假设有效组分中包含各种极性的成分。 目的：快速确定主要或大部分化合物被洗脱时流动相的组成，为优化条件的选择提供依据。 优化条件的选择 选择依据：初始色谱图、梯度洗脱表及一定的经验 示 例：（1）淫羊藿总黄酮（40%）提取物 （2）钩藤总生物碱 （3）黄连药材 （4）知母总皂苷 淫羊藿提取物在初始条件下的色谱图 淫羊藿提取物第一次优化后的色谱图 梯度速率： 初始：100/60min=1.7 /min 优化：0~1.7 CH3CN% CH3CN% Min Min 初始条件 CH3CN% Min 三七 人参 西洋参 CH3CN% Min 起始浓度： 根据初始色谱图中主要色谱峰被 洗脱时的流动相组成，相应减少 ~20%。 流 速： 0.5~2.0 ml/min 2. 气 相 色 谱 法 （1）影响色谱峰分离程度的因素 色谱柱的类型 载气流速 起始柱温 升温速率 （2）研究示例 样品：广藿香油指纹图谱研究过程 方案设计 检测方法 （1）色谱方法 广藿香油为广藿香药材经水蒸汽蒸馏而得到的挥发油，均为易挥发组分，拟采用气相色谱法（GC）。 （2）仪器： Agilent 6890 GC （3）色谱柱的选择 可供选择的色谱柱：极性 非极性 中等极性 （4）进样方式的确定 手动 自动 顶空 2. 供试品溶液的制备 取广藿香油适量，加醋酸乙酯溶解，即得。 注：对于非极性毛细管色谱柱，如供试品溶液中含少量的少，最好干燥后进样。 2. 色谱条件的摸索 （1）对梯度速率及流速进行微调-由粗到精 2. 数 据 获 取 途 径 （1）图形/图像转化成ASCII数据 （2）截片数据 （3）色谱数据 3. 相 似 度 算 法 夹角余弦算法 相关系数算法 优 化 算 法 1. 软件开发原则 2. 市售/常用软件简介 3. 相似度软件使用过程中应注意的问题 （三）、指纹图谱相似度评价软件 1. 软 件 开 发 原 则 系统独立性 (2) 计算方法的科学性 (3) 数据接口通用性 (4) 操作过程及应用的实用性 2. 市售/常用软件简介 浙江大学 陈一宇教授 中南大学 梁逸增教授 沈阳药科大学 毕开顺教授 西北大学 李华教授 二军大 Waters 3. 相似度软件使用过程中应注意的问题 数据接口与数据类型 数据的校正 算法的选择 四、中药指纹图谱的研究方法与思路 （一）、研究方案设计 （二）、样品的选择与收集 （三）、供试品的制备 （四）、指纹图谱色谱条件研究的思路 （五）、相似度值的研究与指纹特征 （一）、研究方案设计 资料收集与整理 文献、工艺资料、质量标准 方案的设计 （1）研究对象-有效成分 （2）研究方法的选择-色谱法(HPLC GC TLC