兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用.pdfVIP

试验研究试验研究 中国养兔 2/2015 15 兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌双重兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌双重 PCRPCR检测方法的建立及应用检测方法的建立及应用 11 11 22 11,,22 于新友于新友,,李天芝李天芝 ,,王金良王金良 ,,沈志强沈志强 ((11..山东绿都生物科技有限公司山东绿都生物科技有限公司,,滨州滨州 256600256600;;22..山东省滨州畜牧兽医研究院山东省滨州畜牧兽医研究院,,滨州滨州 256600256600)) 摘 要:根椐GenBank公布的兔多杀性巴氏杆菌16SrRNA和支气管败血波氏杆菌fimN基因序列,设计两 对引物,在建立两种细菌单项PCR检测方法的基础上,优化双重PCR反应条件,建立了两种细菌的双重 PCR检测方法,用这两对引物对同一样品中的兔多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌核酸为模板进行 双重PCR扩增,结果可同时扩增兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的258bp和449bp的特异性片 段,而对其他4种兔病原菌的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,对兔多杀性巴氏杆菌和支气管 败血波氏杆菌的最低核酸检出限分别均为1pg。通过对78份临床病料检测,将建立的双重PCR技术和单 项PCR方法进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的双重PCR检测方法,具有特 异、快速、准确的特点,可用于对这兔多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌的同时检测和鉴别诊断。 关键词:兔多杀性巴氏杆菌;支气管败血波氏杆菌;双重PCR;检测 中图分类号:S829.1 文献标识码:A 文章编号:1005-6327(2015)02-0015-04 EstablishmentandApplicationofaDualPCRAssayforSimultaneous DetectionofRabbitPasteurellamultocidaandBordetellaBronchiseptica 1 1 2 1,2 YUXin-you ,LITian-zhi,WangJin-liang,SHENZhi-qiang (1.Shandong LvduBio-Industry Co.,Ltd.,Binzhou 256600; 2.AnimalScienceandVeterinaryMedicineAcademy,Binzhou256600) Abstract:AdualPCRassaywasoptimizedtosimultaneouslydetecttwopathogensofrabbitPasteurellamulto⁃ cidaandBordetellaBronchisepticainthisarticle.AccordingtothesequencesofrabbitPasteurellamultocida 16SrRNAgeneandBordetellaBronchisepticafimNgeneinGenBank.Twopairsofprimersweredesignedto amplifytheuniquefragments.Byusingtwopairsofbacteriasspecificprimers,twoPCRassaywereestablished toamplifytheconservativeregionsofthetwobacterias,respectively.Consequently,adualPCRmet