生物化学技术2 沉淀法.pptVIP

（4）脱盐 常用方法：凝胶过滤法和透析法 透析操作的注意事项： 透析袋处理：市售透析袋要D.W洗净，检查无漏洞时再用。若用来去除某些易被金属离子或水解酶破坏的样品中的盐时，透析袋应用含EDTA-Na2的NaHCO3溶液中煮沸10min；并经D.W煮沸、漂洗后再用 透析液的选择：透析液一般为低离子强度的中性缓冲液。对含有辅基的酶透析时，宜在透析液中加入适量的辅基或保护辅基的试剂。为防止微生物的生长，透析应在4℃进行或在透析液中添加0.02%的NaN3 (二)有机溶剂沉淀法 1.原理 与盐溶液一样具有脱水作用，使Pro表面的水化膜破坏 降低溶剂系统的介电常数，即降低极性（而蛋白质为水溶性物质） 2.常用有机溶剂：MeOH、EtOH、Me2CO等 3.有机溶剂的使用量： V表示加入有机溶剂的体积； V0表示蛋白溶液的原始体积 S1表示蛋白溶液中有机溶剂的浓度(体积百分浓度) S2表示蛋白溶液中欲达到的有机溶剂浓度(体积百分浓度) C表示有机溶剂的浓度（如无水EtOH ，则C=100，95% EtOH ，则C=95） 4.注意事项： 中性盐作用。即在有机溶剂沉淀时，加入适量中性盐，一方面可增加Pro在有机溶剂中的溶解度，另一方面可防止Pro变性（μ≤0.05）；提高分级效果 低温下操作。因为有机溶剂加入水溶剂中会放热，若