ELISA操作要求及质量控制.pdfVIP

2008年第9期 千圈鼓业妣 ELISA操作要求及质量控制 酶联免疫吸附试验(ELISA)是医学检验的 显色，使结果的光密度(OpticalDensity，OD) 免疫学检验方法之一．已广泛应用于对病原微生 值升高。产生假阳性的检测结果。 物的免疫学检查试验中。用ELISA法检测是目前 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染， 最常用的实验室检验方法之一。与任何实验室检 菌体中可能含有内源性HRP(辣根过氧化物)， 查方法一样．ELISA存在少量的假性结果(假阳也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久。可 性、假阴性)，对临床诊断和治疗会有一定影响。 发生聚合。在间接法ELISA中可使本底加深。一 目前．ELISA已经普遍使用洗板机、全自动酶标般说来．在5d内测定的血清标本可放置于4℃的 分析仪．使试验数据的准确性和真实性都有明显 环境中；超过1周测定的需低温冰存。冻结血清 提高。但试验设备的自动化并不代表试验数据 溶解后，蛋白质局部浓缩。分布不均，应充分混 100％可靠．还要求试验人员具备扎实的专业知 匀．动作宜轻缓，避免出现气泡。可上下颠倒混 识和熟练的试验操作技术．并且要对实验室的内 合．不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的 外环境进行适时监控。从试验软件、仪器设备、 血清标本应先离心或过滤。澄清后再检测。反复 操作程序、人员素质及环境监控等方面确保试验 冻融会使抗体效价跌落。所以。测抗体的血清标 结果的准确性和可靠性。笔者就ELISA操作中容本如需保存作多次检测。宜少量分装冰存。保存 易忽略的问题及注意事项作以下阐述。 血清自采集时就应注意无菌操作．也可加入适当 l 操作要点 防腐剂。 ELISA是目前检验中应用最多的方法．灵敏2．2试剂的准备按试剂盒说明书的要求准备试 度高．操作简便，可广泛应用于各种抗原、抗体 验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子 的测定。但是影响其试验结果准确性的因素也较 水。均应为新鲜的、高质量的试剂。自配的缓冲 多。优质的试剂、良好的仪器和正确的操作是保 液应用pH计测量校正。从冰箱中取出的试验用试 证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。 剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试 2操作规范 验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 2．1标本的采取和保存大部分ELISA检测均以2．3 加样 一般用微量加样器加标本．按规定的 血清为标本。首先。血清应是血液自然收缩分离 量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发 所得(血浆标本离心要充分)。否则纤维蛋白易 生交叉污染。也可用一次性的定量塑料管加样。 吸附于反应孔孔底而不易被洗掉．发生假阳性结 有些测定(如间接ELISA法)需用稀释的血清。 果。其次，溶血对部分ELISA项目结果也有影响，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样．也可 标本溶血时可因红细胞的破坏、溶解释放出大量 在板孔中加入稀释液。再在其中加入血清标本， 具有过氧化物酶活性的血红蛋白．产生非特异性 然后在微型振荡器上振荡1min。 35 万方数据 呷酗灿舢 2008年第9期 2．4 温育 在ELISA中一般有2次抗原抗体反应． 结果。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着 即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成 的液体，然后，将板正确