实验四植物的组织培养.pptVIP

植物的组织培养肖鸿运 肖鸿运 实验目的： 1、熟练掌握植物组织培养的操作 2、理解并掌握植物组织培养的原理和 条件。 实验原理 植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具有全能性。 组织培养的特点是： 组织培养的特点是： 取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制。 组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段；而且在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等生产领域得到广泛的应用。 植物组织培养过程 外植体 器材和药品 高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、循环水式真空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱,搪瓷杯、搪瓷盘、100 ml三角烧瓶（12个/组）、250 ml三角瓶（2个/组）、试剂瓶、解剖刀柄与刀片、单面刀片、剪刀、长镊子、培养皿、移液管、漏斗、量筒、烧杯（50、100、500、1000 m1），酒精灯、火柴、玻璃棒、吸耳球、封口薄膜、牛皮纸、线绳、牛皮筋、脱脂棉、滤纸、pH试纸（5.4-7.0）、标签纸、称量纸、药勺等。 药品和器材 次氯酸钠消毒液, 75%的酒精 ,0.2％的升汞溶液. 1 N 盐酸,1 N NaOH,0.8%的琼脂,3%的蔗糖. 0.1 mg/ml的2,4-D溶液：取25 mg的 2,4-D，加入少量95%的酒精和1 N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250 ml。 0.1 mg/ml 的6-BA溶液：取25 mg的6-BA，用少量1 N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250 ml。 表.1 MS培养基储备液的配制 胡萝卜组织培养 1、加热培养基，在60-70℃时加入6-BA(0.1mg/L)、NAA(0.5mg/L)和2ml蔗糖溶液。 2. 取两个50ml的小烧杯,分别倒入25ml的70%的酒精和0.2%的升汞。 3. 取胡萝卜贮藏根，洗净，然后将胡萝卜根于70％酒精中浸泡数秒钟。 4. 浸于0.2％氯化汞（升汞）液中消毒灭菌10 min后,再用无菌水冲洗3—4次。 胡萝卜组织培养 5. 将灭菌材料放在灭菌的滤纸上,吸干水分。 6. 用解剖刀将胡萝卜切去表皮和中柱，取皮层，切成0.5cm见方的小块，接种于MS附加 2.0mg/L 2，4-D 培养基内,于 25℃，黑暗或漫射光下培养,14—21 天后继代一次。 实验结果： 培养不同的 植物组织和 加不同的生 长素及不同 的浓度可以 培养出不同的 植物体或组织。 植物组织大规模培养 注意事项： 配制培养基时，一定要注意调节pH。 2. 外植体不能太小，否则会影响愈伤组织的形成。 * * 离体的植物器官、组织或细胞 脱分化 愈伤组织 植物激素： 细胞分裂素、生长素 根、芽 植物体 再分化 植物组织培养条件： 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。 *